[发明专利]视网膜色素上皮细胞的制备方法在审
| 申请号： | 201880026874.0 | 申请日： | 2018-03-08 |
| 公开（公告）号： | CN110573610A | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 黑田贵雄 | 申请（专利权）人： | 大日本住友制药株式会社;希里欧斯株式会社 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;A61K35/30;A61K35/545;A61P27/02;C12N5/10 |
| 代理公司： | 11021 中科专利商标代理有限责任公司 | 代理人： | 崔巍;张莹 |
| 地址： | 日本国大*** | 国省代码： | 日本;JP |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 视网膜色素上皮细胞 多能干细胞 培养基 制备 信号转导途径抑制剂 细胞凋亡抑制剂 自由 细胞 | ||
1.一种视网膜色素上皮细胞的制备方法，包括以下步骤：
(1)第一步，在包含选自由FGF受体抑制剂和MEK抑制剂组成的组中的至少一种的培养基中培养多能干细胞不超过30天的期间，和
(2)第二步，在含有选自由Rho信号转导途径抑制剂和细胞凋亡抑制剂组成的组中的至少一种的培养基中培养第一步中获得的细胞，以形成视网膜色素上皮细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一步在无血清条件下进行。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第一步在不存在饲养细胞的情况下进行。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其中所述第一步中的培养基还包含用于维持未分化状态的因子。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中所述用于维持未分化状态的因子是FGF信号转导途径激动剂。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述FGF信号转导途径激动剂是bFGF。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述FGF受体抑制剂是选自由PD173074和SU5402组成的组中的至少一种。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述MEK抑制剂是选自由PD0325901、PD184352、U0126、TAK-733和AZD-8330组成的组中的至少一种。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述第二步中的培养基不含有外源Nodal信号转导途径抑制剂或外源Wnt信号转导途径抑制剂。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述第二步中的培养基不含有除了Rho信号转导途径抑制剂和细胞凋亡抑制剂以外的影响多能干细胞分化诱导的外源性物质。
11.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述第二步中的培养基不含有除了Rho信号转导途径抑制剂和细胞凋亡抑制剂以外的影响多能干细胞分化诱导成外胚层细胞的外源性物质。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述Rho信号转导途径抑制剂是选自由Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂和肌球蛋白抑制剂组成的组中的至少一种。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂选自由Y27632和法舒地尔组成的组中的至少一种。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述细胞凋亡抑制剂是胱天蛋白酶抑制剂。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述胱天蛋白酶抑制剂是Z-VAD-FMK。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的制备方法，其中所述多能干细胞为灵长类动物多能干细胞。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的制备方法，其中所述多能干细胞为人多能干细胞。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述第一步中的培养期为2天-13天。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述第一步中的培养期为4天-6天。
20.一种评价测试物质的毒性或药效的试剂，其包含通过根据权利要求1-19中任一项所述的制备方法制备的视网膜色素上皮细胞。
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