[发明专利]视网膜色素上皮细胞的制备方法

说明书

本发明提供一种制备视网膜色素上皮细胞的方法，包括以下步骤：(1)第一步，在含有选自由FGF受体抑制剂和MEK抑制剂组成的组中的至少一种的培养基中培养多能干细胞不超过30天的期间，和(2)第二步，在含有选自由Rho信号转导途径抑制剂和细胞凋亡抑制剂组成的组中的至少一种的培养基中培养第一步中获得的细胞，以形成视网膜色素上皮细胞。使用该方法，以更高效和便捷的方式从多能干细胞制备视网膜色素上皮细胞是可能的。

技术领域

本发明涉及视网膜色素上皮(RPE)细胞的制备方法等。

背景技术

视网膜色素上皮细胞是存在于视网膜最外层的色素上皮细胞，且在诸如感光细胞的外节的吞噬、视觉物质的再循环等感光细胞的维持中起重要作用。由年龄增长等引起的视网膜色素上皮细胞的异常所引起的年龄相关性黄斑变性是一种引起中央视觉丧失或失明的眼科疾病，并且期望开发一种治疗该疾病的有效方法。最近，作为年龄相关性黄斑变性的新型治疗方法，补充或替代视网膜色素上皮细胞的细胞移植疗法引起了大量关注，并且期待将视网膜色素上皮细胞用作用于细胞治疗的移植材料。迄今为止，虽然已经有一些关于使用人多能干细胞诱导分化为视网膜色素上皮细胞的方法的报道(非专利文献1和2，专利文献1、2、3和4)，但是由于在再生医学产业中需要稳定地大量制备高品质视网膜色素上皮细胞的技术，因此期望更高效和便捷的制备方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开WO 2012/173207

专利文献2：国际公开WO 2015/053375

专利文献3：国际公开WO 2015/053376

专利文献4：美国公开US 2013/0224156

非专利文献

非专利文献1：Stem Cell Reports，2(2)，205-218(2014)

非专利文献2：Cell Stem Cell，10(6)，771-785(2012)

发明内容

本发明所要解决的技术问题

为了在再生医疗等中使用多能干细胞来源的视网膜色素上皮细胞时稳定地制备大量的该细胞，迫切需要开发一种更高效和便捷的制备方法。

解决问题的手段

鉴于上述情况，本发明的发明人进行了深入的研究，结果完成了本发明。

即，本发明涉及以下内容。

[1]一种视网膜色素上皮细胞的制备方法，包括以下步骤：

(1)第一步，在包含选自由FGF受体抑制剂和MEK抑制剂组成的组中的至少一种的培养基中培养多能干细胞不超过30天的期间，和

(2)第二步，在含有选自由Rho信号转导途径抑制剂和细胞凋亡抑制剂组成的组中的至少一种的培养基中培养第一步中获得的细胞，以形成视网膜色素上皮细胞。

[2]根据上述[1]所述的方法，其中所述第一步在无血清条件下进行。

[3]根据上述[1]或[2]所述的方法，其中所述第一步在不存在饲养细胞的情况下进行。

[4]根据上述[1]-[3]中任一项所述的制备方法，其中所述第一步中的培养基还包含用于维持未分化状态的因子。

[5]根据上述[4]所述的制备方法，其中所述用于维持未分化状态的因子是FGF信号转导途径激动剂。

[6]根据上述[5]所述的方法，其中所述FGF信号转导途径激动剂是bFGF。