[发明专利]用于纯化白蛋白的方法

说明书

描述了一种用于从血浆中纯化白蛋白的方法。所述方法包括(a)使所述血浆与一定量的辛酸钠(NaCP)接触，所述辛酸钠(NaCP)的量取决于所述血浆中的总蛋白浓度和NaCP与总蛋白的比率；(b)在接近中性的pH值范围内加热所述血浆；以及(c)将所述白蛋白与非白蛋白相分离。所述方法提供了高收率和纯度的白蛋白溶液。

对相关申请的交叉引用

本申请要求2017年3月16日提交的美国临时申请号62/472,007的权益，该美国临时申请以引用的方式整体并入本文。

技术领域

本公开涉及一种用于从血浆中纯化白蛋白的新方法。所述方法包括使血浆与一定量的辛酸钠(NaCP)接触，所述量取决于血浆中的总蛋白浓度和NaCP与总蛋白的比率；在接近中性的pH值范围内对所述血浆进行巴氏灭菌；以及将白蛋白与非白蛋白相分离。所述方法提供了高收率和纯度的白蛋白溶液。

背景技术

人类和动物的血液是具有治疗特性的分子的来源。这些分子中有许多是可以在血浆或血清中发现的蛋白质。这些蛋白质已经成为特异性分离的目标，目的在于纯化和标准化用作人类治疗剂的分子。例如，白蛋白、免疫球蛋白G、因子VIII和α-1-蛋白酶抑制因子都可以作为分离的治疗产品获得。

用于分级分离血浆或血清蛋白的常规上使用的方法之一描述于美国专利号2,390,074中，其公开了一种用于大规模分级分离血浆或血清蛋白的方法，所述方法是通过利用乙醇沉淀并且调节温度、pH值、离子强度和时间以控制某些蛋白质从人类血浆中的沉淀而实现的。所述分级分离方法包括将乙醇逐步添加到血浆原料中以获得几个级分和包含不同富集蛋白质溶液的相应上清液。

乙醇沉淀法存在以下缺点：一些蛋白质在乙醇存在下倾向于变性，从而导致待分离的蛋白质的收率降低以及被聚集体污染，在可以获得可接受的治疗产品之前需要去除所述聚集体。此外，沉淀的蛋白质需要再溶解以用于进一步处理，这会产生显著水平的不溶性蛋白质和脂质物质，进而妨碍最终产品的纯化，从而导致收率进一步降低。

此外，特别是已经通过各种分级分离方法从血浆中纯化了人血清白蛋白(HSA)。白蛋白是人类血浆中最丰富的蛋白质，占血清蛋白的高达60％。通过遵循药物指南来配制治疗性白蛋白。根据监管指南，所述制剂含有N-乙酰基色氨酸和辛酸盐，继而在60℃±0.5℃进行巴氏灭菌10.5小时±0.5小时以达到病毒灭活的目的。作为稳定剂的这两种试剂的量是基于HSA的量确定的，被设定为每克HSA蛋白0.08mmol±0.016mmol。

在巴氏灭菌期间，通过辛酸盐/色氨酸方案的存在来维持HSA的完整性。认为辛酸根离子通过与HSA结合而降低可逆的部分去折叠的速率，从而抑制了导致不可逆沉淀的途径中的一个步骤。Faroongsarng和Kongprasertkit(2014)观测到在每克HSA 0.08mmolNaCP存在下，HSA的变性温度从67.23℃升高到72.85℃。

白蛋白分离领域中的基本概念和现有技术已经描述于例如美国专利号2,705,230、美国专利号3,992,367、美国专利号4,156,681、美国专利号5,118,794、美国专利号6,022,954和美国专利号6,504,011中。这些文献以引用的方式并入本文。

美国专利号6,022,954涉及一种用于从人类或动物生理溶液，如血浆或血浆级分制备纯化的白蛋白的方法。该文献教导了使用阴离子洗涤剂进行脱脂和使用离子交换树脂进行两个色谱分离阶段的方法。脱脂处理由以下步骤组成：在60℃并且在少量作为稳定剂的NaCP存在下使来自第一色谱阶段的白蛋白溶液与洗涤剂接触约1小时。巴氏灭菌处理由以下步骤组成：将溶液在超过60℃加热至少10小时。

美国专利号5,118,794涉及一种用于在容器中在热处理期间稳定人白蛋白的方法，其包括添加表面活性剂。该文献公开了一种方法，其包括在pH 7.0下使用每克白蛋白0.08mmol-0.64mmol NaCP的量的少量NaCP对溶液进行巴氏灭菌。该文献还公开了在60℃对产品进行最终巴氏灭菌10小时。