[发明专利]用于肿瘤预防的基于酵母的免疫疗法

权利要求书

1.一种用于制备免疫治疗性酵母的方法，所述方法包括下列步骤：

a)获得基因修饰酵母，所述基因修饰酵母在其壁上表达一种或多种肿瘤抗原以及任选的用于靶向树突状细胞的蛋白或多肽；

b)将所述基因修饰酵母透化以获得免疫治疗性酵母，任选地在透化步骤之前或之后使所述酵母灭活。

2.如权利要求1所述的方法，其中，步骤a)是：获得基因修饰酵母，所述基因修饰酵母在其壁上表达一种或多种式(Ia)的融合蛋白：

[用于靶向树突状细胞的蛋白或多肽]_n-[肿瘤抗原]_x-[肽接头]_m-[用于锚定至基因修饰酵母的壁上的蛋白或多肽](Ia)；

n等于0或1，m等于0或1，并且x是从1至300的整数，优选从1至50的整数。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，步骤a)包括下列步骤：

a1)向酵母中引入各自包含式(IIa)或式(IIb)的核酸序列的一种或多种载体：

[编码用于寻址基因修饰酵母的壁的多肽的核酸序列]-[编码用于靶向树突状细胞的蛋白或多肽的核酸序列]_n-[编码肿瘤抗原的核酸序列]_x-[编码肽接头的核酸序列]_m-[编码用于锚定至基因修饰酵母的壁上的蛋白或多肽的核酸序列](IIa)，n等于0或1，m等于0或1，并且x是从1至300的整数，优选从1至50的整数；

[编码用于靶向树突状细胞的蛋白或多肽的核酸序列]_n-[编码肿瘤抗原的核酸序列]_x-[编码肽接头的核酸序列]_m-[编码用于锚定至基因修饰酵母的壁上的蛋白或多肽的核酸序列]-[编码用于寻址基因修饰酵母的壁的多肽的核酸序列](IIb)，n等于0或1，m等于0或1，并且x是从1至300的整数，优选从1至50的整数；

从而获得能够在其壁上表达一种或多种式(Ia)的融合蛋白的基因修饰酵母：

[用于靶向树突状细胞的蛋白或多肽]_n-[肿瘤抗原]_x-[肽接头]_m-[用于锚定至基因修饰酵母的壁上的蛋白或多肽](Ia)，n等于0或1，m等于0或1，并且x是从1至300的整数，优选从1至50的整数；以及

a2)在适合于在所述基因修饰酵母的壁上表达所述融合蛋白的条件下培养所述基因修饰酵母。

4.如前述权利要求中任一项所述的制备方法，其中，所述酵母选自酵母属、裂殖酵母属、克鲁维酵母属、Ogataea属或假丝酵母属，优选酵母属；优选地，所述酵母是酿酒酵母。

5.如权利要求2-4中任一项所述的制备方法，其中，锚定蛋白或多肽是在所述酵母的壁上表达的酵母蛋白或多肽，优选选自Aga2p或Sed1p。

6.如前述权利要求中任一项所述的制备方法，其中，所述基因修饰酵母用水/乙醇混合物进行透化。

7.如权利要求1-6中任一项所述的制备方法，其中，所述用于靶向树突状细胞的蛋白或多肽选自：

能够特异性结合蛋白DEC-205的抗体；能够特异性结合蛋白DEC-205的抗体片段；细菌鼠疫耶尔森氏菌的纤溶酶原激活物(PLA)；或衍生自细菌鼠疫耶尔森氏菌的纤溶酶原激活物(PLA)的序列。