[发明专利]细胞层叠体的制造方法

说明书

本发明涉及一种细胞层叠体的制造方法，其使用具有底部及从底部的外缘立起的侧壁部的容器、多孔膜、在与容器的内底面不接触的位置对置于内底面保持多孔膜的保持部件来制造在多孔膜的两面具备细胞层的细胞层叠体，该细胞层叠体的制造方法包括：多孔膜由保持部件保持为在与容器的内底面不接触的位置对置于内底面的状态，而且在重力方向上容器的底部在上方且多孔膜在下方的状态下，在与容器的内底面和多孔膜表面接触的液体培养基中培养第一细胞；及多孔膜由保持部件保持为在与容器的内底面不接触的位置对置于内底面的状态，而且在重力方向上容器的底部在下方且多孔膜在上方的状态下，在多孔膜的下侧表面上培养第一细胞，在多孔膜的上侧表面上培养第二细胞。

技术领域

本发明涉及一种细胞层叠体的制造方法。

背景技术

制造具有与活体内组织类似的结构的人工细胞组织的方法，例如在专利文献1及专利文献2中公开。

在专利文献1中公开了：在蜂窝结构体薄膜的两面培养细胞，得到了细胞的三维聚集体。即，在专利文献1中公开了：在蜂窝结构体薄膜的一个表面接种细胞并使其粘附于薄膜，接着，在另一表面接种细胞，在薄膜的两面培养了相同种类的细胞(肝细胞或心肌细胞)。

在专利文献2中公开了一种血脑屏障模型，其在被称为细胞培养插入物(cellculture insert)的过滤器器件的过滤器上表面配置了脑毛細血管内皮细胞层，在过滤器下表面配置了脑周细胞层，在培养板的底面配置了星形胶质细胞层。在本发明中，在将细胞培养插入物上下倒置的状态下，在过滤器上接种脑周细胞而进行培养之后，将细胞培养插入物设置于培养板内，并在细胞培养插入物内侧接种血管内皮细胞，由此在过滤器的两面形成有细胞层。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2002-335949号公报

专利文献2：日本专利第5113332号公报

发明内容

发明要解决的技术课题

为了得到替代动物实验的药物评价用或病情评价用的人工细胞组织，需要构建具有与活体内组织近似的结构及功能的细胞组织。从构建具有与活体内组织近似的结构及功能的细胞组织的观点出发，期望如专利文献1中的蜂窝结构体薄膜那样将开口率高的多孔膜设为细胞培养的脚手架，并在多孔膜的两面培养细胞。并且，也要求构建一种细胞层叠体，其根据人工细胞组织所模拟的活体组织，在多孔膜的两面分别培养不同种类的细胞，细胞的种类在两个细胞层中不同。

然而，在专利文献1中未具体地公开在蜂窝结构体薄膜的两面分别培养不同种类的细胞的方法。

另一方面，在专利文献2中公开了：在细胞培养插入物的过滤器的上表面及下表面分别培养不同种类的细胞的方法。然而，在该培养方法中使用的细胞培养插入物是Transwell(注册商标)插入物，该过滤器是径迹蚀刻膜(track etched membrane、TE膜)。TE膜通常开口率低(2％～20％左右)，因此即使在TE膜上放置细胞悬浮液，液体培养基也不易通过TE膜而落下。从而，若是将具备TE膜作为过滤器的细胞培养插入物，则能够在上下倒置的状态下在过滤器上接种细胞悬浮液而进行细胞培养。然而，在细胞培养插入物的过滤器中适用了如专利文献1中的蜂窝结构体薄膜那样开口率高的多孔膜的情况下，若在上下倒置的状态下在过滤器上接种细胞悬浮液，则导致液体培养基通过多孔膜的孔而落下，因此无法进行细胞培养。

本发明的实施方式根据上述情况而完成。

本发明的目的在于提供一种新型细胞层叠体的制造方法，并解决该问题作为课题。

用于解决技术课题的手段

用于解决上述课题的具体方法中包括以下方式。