[发明专利]纯化白蛋白融合蛋白的方法

权利要求书

1.纯化白蛋白融合蛋白水溶液的方法，其中所述方法包括：(i)将所述融合蛋白溶液加载到包含阳离子交换色谱树脂的柱上的步骤，以及(ii)使用具有含阳离子的梯度的洗脱缓冲液从所述柱上洗脱所述融合蛋白的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述白蛋白融合蛋白是MIC-1人血清白蛋白融合蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述含阳离子的梯度是含Na⁺、Mg²⁺、NH₄⁺、K⁺或Ca²⁺的梯度。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述含阳离子的梯度是含Ca²⁺的梯度。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述洗脱缓冲液的pH为4.0-5.0。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述洗脱缓冲液的pH为4.2。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中使用洗脱缓冲液梯度从所述阳离子交换柱上洗脱所述白蛋白融合蛋白，该洗脱缓冲液梯度包含20mM乙酸、11mM NaOH和500mM CaCl₂，pH为4.2，并且该洗脱缓冲液中CaCl₂的含量在pH 4.2下逐渐增加至500mM。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在进行根据权利要求1-7中任一项所述的纯化方法之前，进行所述白蛋白融合蛋白溶液的阴离子交换纯化步骤。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在包含乙醇和Ca²的洗涤后，用pH 7.7的Tris缓冲氯化钠溶液从阴离子交换柱上洗脱所述白蛋白融合蛋白。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在根据权利要求1-9中任一项所述的纯化方法之后是用包含20mM乙酸、10mMNaOH和100mMNaCl的pH 4.6缓冲液洗涤所述柱的步骤。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如根据470nm与280nm之间的吸光度之比所测量的，所述方法将黄色杂质的含量降低至少3.0倍。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如通过ELISA所测量的，所述方法将HCP杂质的含量降低至少3.0倍。

13.生产白蛋白融合蛋白的方法，其包括根据权利要求1-12中任一项所述的纯化白蛋白融合蛋白溶液的方法。