[发明专利]测量分子间和/或分子内相互作用的方法

说明书

一种测量标记粒子与配体之间的相互作用的方法，其包括步骤：a)提供包含在溶液中的标记粒子和配体的样品，其中所述标记粒子溶解或分散在溶液中或固定在固体载体上；b)在预定温度下荧光激发所述标记粒子和检测受激粒子的荧光；c)以溶液中的不同配体浓度重复步骤(a)和(b)多次；和d)基于标记粒子的荧光的配体浓度依赖性变化测定标记粒子与配体之间的相互作用，其中所述标记粒子用一种或多种染料标记。

本发明涉及改进的测量粒子的分子间和/或分子内相互作用和/或粒子的修饰的方法。

发明背景

溶剂敏感的荧光染料，即部花青染料已被报道适合通过共价连接到蛋白质上而用于体内成像。这些染料可用于研究蛋白质的构象变化(Hahn等人在J.Am.Chem.Soc.2003,125,4132–4145中)。

聚甲炔染料已被报道可用作用于研究这些染料与生物大分子如核酸和蛋白质的非共价相互作用的光谱荧光探针(Tatikolov,Journal of Photochemistry andPhotobiology C:Photochemistry Reviews 2012,13,55–90)。

还已报道，花青染料的光物理性质受生物分子内的分子环境影响，因此使这些染料适合作为生物物理研究中的荧光探针(Levitus等人,Quaterly Reviews of Biophysics2010,1–29)。

蛋白质诱发的荧光增强是已报道的一种效应以描述在蛋白质结合至荧光探针附近的核酸时发生的荧光强度提高。特别地，共价连接到DNA上的花青染料在蛋白质结合至DNA时发生荧光强度提高(Myong等人，PNAS 2011,108,7414–7418中；Levitus等人，J.Phys.Chem.Lett.2015,6,1819–1823中)。

部花青染料已被报道可用作检测和量化蛋白质活性如构象变化和配体结合的染料。此外，在WO 2005/088308 A2中公开了可结合至所选靶的生物传感器分子和检测靶生物分子和蛋白质活性的方法。

在WO 2008/061706 A1中公开了通过热光学表征测量粒子的相互作用，尤其是生物分子与配体之间的相互作用的方法。这种热光学表征基于由强温度梯度的建立产生的热泳。

发明概述

本发明涉及改进的测量粒子的分子间和/或分子内相互作用和/或粒子的修饰的方法。特别地，本发明的方法提供改进的灵敏度。此外，本发明的方法使用能够检测通过先前已知的方法不能以足够的灵敏度测量的相互作用的染料。此外，该方法不依赖于加热方法/来源，也不依赖于反应容器的几何构造(即该实验可在孔板中进行而不仅仅在毛细管中进行)。

在本发明的方法中，使用被一种或多种温敏染料标记的标记粒子。

在第一个方面中，本发明涉及一种测量标记粒子与配体之间的相互作用的方法。第一个方面的方法包括下列步骤：

a)提供包含在溶液中的标记粒子和配体的样品，其中所述标记粒子溶解或分散在溶液中或固定在固体载体上；

b)在预定温度下荧光激发所述标记粒子和检测受激粒子的荧光；

c)以溶液中的不同配体浓度重复步骤(a)和(b)多次；和

d)基于标记粒子的荧光的配体浓度依赖性变化测定标记粒子与配体之间的相互作用。

在第二个方面中，本发明涉及一种测量分子间和/或分子内相互作用的方法。第二个方面的方法包括下列步骤：

a)提供包含标记粒子的样品；

b)在第一温度下荧光激发所述标记粒子和检测受激粒子的第一荧光；

c)将所述样品加热或冷却到第二温度；

d)在第二温度下荧光激发所述标记粒子和检测受激粒子的第二荧光；