[发明专利]一种快速高效纯化血清群X脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖的工艺

权利要求书

1.一种快速高效纯化血清群X脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖的工艺，其中所述工艺包含以下步骤：

(a)通过添加预定的简单盐溶液和特定浓度的盐干粉来处理血清群X脑膜炎奈瑟菌的发酵液；

(b)向步骤(a)中盐处理后的溶液中加入特定体积的有机溶剂；

(c)将步骤(b)中的溶液在室温下混合特定时间；

(d)对步骤(c)的溶液以特定转速(rpm)和预定时间进行离心；

(e)从步骤(d)离心后的溶液中收集上清液；

(f)将步骤(e)中所述上清液浓缩并使用分子量截留膜进行超滤，获得部分纯化的细菌多糖；

(g)在特定条件下用至少一种阳离子去垢剂沉淀步骤(f)中的所述部分纯化的多糖，然后在特定转速(rpm)下离心预定时间，获得第一沉淀物；

(h)将所述第一沉淀物溶解在无机沉淀剂中；

(i)向步骤(h)中溶解后的第一沉淀物中加入至少一种有机溶剂，然后在预定条件下进行培养；

(j)将步骤(i)的溶液在特定条件下进行离心，然后收集第二沉淀物；

(k)将所述第二沉淀物溶解于MQW中，并用特定的化学试剂和特定的有机溶剂进行处理，然后在特定条件下进行培养；

(l)将步骤(k)中培养后的溶液在特定离心条件下进行离心，然后收集上清液；

(m)对步骤(l)中所述上清液进行碳过滤，获得碳滤液，直到达到所需的光密度；

(n)使用PES过滤组件对步骤(m)中的所述碳滤液进行过滤，然后在特定条件下进行浓缩和超滤；

(o)使用特定的PES过滤组件对步骤(n)中超滤后的上清液进行过滤，获得纯化的多糖；

(p)在特定条件下储存步骤(o)中的所述纯化的多糖；

其中所述工艺是经济的、可规模放大的并且在147-323mg/L的发酵液范围内能够生产纯化的血清群X脑膜炎奈瑟菌多糖。

2.根据权利要求1所述工艺，其中所述预定的简单盐溶液和特定浓度的盐干粉是0.25±0.1M柠檬酸三钠和来自2M储存液的25±5％体积/体积硫酸钠溶液。

3.根据权利要求1所述工艺，其中步骤(b)中的所述有机溶剂是25±5％体积/体积的无水酒精。

4.根据权利要求1所述工艺，其中步骤(c)中用于所述混合的特定时间是2±0.5小时。

5.根据权利要求1所述工艺，其中步骤(d)中的所述离心是在10000-11000x g的条件下离心30±5分钟。

6.根据权利要求1所述工艺，其中步骤(f)中的所述超滤是使用具有10-12体积MQW的100kDa PES膜超滤进行的。

7.根据权利要求1所述工艺，其中步骤(g)中的所述阳离子去垢剂是15±2％体积/体积的10％CTAB储存液。

8.根据权利要求1所述工艺，其中步骤(g)中用阳离子去垢剂进行沉淀的所述特定条件是室温4±1小时。

9.根据权利要求1所述工艺，其中步骤(g)中的所述离心是在10000-11000x g的条件下离心40±10分钟。

10.根据权利要求1所述工艺，其中所述无机沉淀剂是0.15±0.03M的氯化钙溶液。

11.根据权利要求1所述工艺，其中步骤(i)中的所述至少一种有机溶剂是90±5％体积/体积的无水乙醇。

12.根据权利要求1所述工艺，其中步骤(i)中的所述培养的所述预定条件是2-8℃下培养过夜。

13.根据权利要求1所述工艺，其中所述离心的特定条件是在10000-11000x g的条件下离心40±10分钟。