[发明专利]一种快速高效纯化血清群X脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖的工艺

说明书

本发明公开了一种快速高效纯化血清群X脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖的工艺。本发明的荚膜多糖能够用于生产经济的单价荚膜多糖或多糖蛋白轭合物疫苗或多价组合疫苗以及血清群X脑膜炎感染的诊断工具。该工艺采用简单的盐和少量乙醇。该工艺是快速的、经济的并且可规模放大的，且具有高产量的纯化的血清群X脑膜炎奈瑟菌多糖。

技术领域

本发明涉及一种快速高效纯化血清群X脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖的工艺。本发明的血清群X脑膜炎奈瑟菌细菌荚膜多糖能够用于生产经济的单价荚膜多糖或多糖蛋白轭合物疫苗或多价组合疫苗以及血清群X脑膜炎感染的诊断工具。

背景技术

脑膜炎奈瑟菌(脑膜炎球菌或Men)是一种好氧的革兰氏阴性菌，其已经在血清学上主要分为A、B、C、D、29E、H、I、K、L、W135、X、Y和Z13个血清群。该分组系统是基于生物体的荚膜多糖。

WHO官方网站指出，脑膜炎奈瑟菌是世界范围内最常见的细菌性脑膜炎病因之一，是唯一能够引起大规模脑膜炎流行的细菌。据报道，该流行病的发病率高达每10万居民1000例，特别是在撒哈拉以南的非洲地区。

脑膜炎奈瑟菌通过气溶胶或直接接触患者或健康携带者的呼吸道分泌物进行传播。一般来说，地方性疾病主要发生在儿童和青少年人群中，3-12个月的婴儿发病率最高，而年龄较大的儿童和年轻人更容易患流行性疾病。然而，脑膜炎球菌病的快速发展往往导致发病后1-2天内死亡。脑膜炎奈瑟菌感染可以通过接种疫苗进行预防。

在非洲和亚洲，MenA是最普遍的血清群，但在北美则很少/几乎没有。在欧洲和美国，血清群B(MenB)是导致疾病和死亡的主要诱因，其次是血清群MenC和血清群MenW。近几年，撒哈拉以南的非洲地区开始出现MenX疫情。根据Xie O等人的文献(“非洲血清群X脑膜炎球菌疾病的出现：需要疫苗”，疫苗.2013Jun 12；31(27)：2852-6)，血清群X脑膜炎球菌曾被认为是散发性脑膜炎的罕见病因，但在2006-2010年期间，在尼日尔、乌干达、肯尼亚、多哥和布基纳法索都爆发了血清群X脑膜炎，后者的6732例报告病例中发现了至少1300例血清群X脑膜炎。

根据另一份NCBI的出版物，在2006-2009年期间，多哥的702例确诊的细菌性脑膜炎病例中，血清群X脑膜炎球菌占16％。2007年3月，科扎区发生了一次血清群X脑膜炎球菌爆发，血清群X脑膜炎球菌季节性累积发病率为33/100000。在2007-2010年期间，布基纳法索的血清群X脑膜炎球菌发病率占778例确诊细菌性脑膜炎病例的7％，2009至2010年有所增加(分别占所有确诊病例的4％至35％)。2010年，布基纳法索北部和中部地区发生了血清群X脑膜炎球菌流行病；3-4月期间，血清群X脑膜炎球菌的最高地区累积发病率估计为130/100000。

多血清群已经阻碍了脑膜炎球菌疾病通用疫苗的开发。因为迫切需要与这种致命疾病作斗争，第一支脑膜炎多糖疫苗的生产于1978年完成。后来观察到，普通多糖疫苗对2岁以下儿童并不十分有效。这些观察结果导致了进一步的研究，揭示了婴儿的免疫系统还不成熟，不能对普通多糖产生免疫应答。

免疫应答可分为T细胞依赖性(TD)免疫应答和非T细胞依赖性(TI)免疫应答。已知蛋白质和肽通过刺激辅助性T淋巴细胞和产生记忆细胞来诱导TD抗原。相比之下，多糖属于不会诱导T细胞激活并且不形成任何记忆B细胞的TI抗原，这是应对婴儿时的一个主要缺点，因为他们的免疫系统尚未成熟。

因此，有必要将细菌多糖与蛋白质载体轭合从而诱导T细胞依赖性免疫应答，其特征是在婴儿体内的免疫原性增强、保护时间延长并减少脑膜炎球菌鼻咽携带。这一需求是由多糖蛋白轭合物疫苗生产的独创性研究实现的，1999年英国批准了第一种脑膜炎球菌轭合物疫苗。