[发明专利]使用CRISPR/Cpf1在T细胞中进行基因编辑的组合物和方法在审

专利信息
申请号: 201880042161.3 申请日: 2018-05-02
公开(公告)号: CN110785489A 公开(公告)日: 2020-02-11
发明(设计)人: 赵阳兵;任江涛 申请(专利权)人: 宾夕法尼亚大学董事会
主分类号: C12N9/00 分类号: C12N9/00;C12N15/85;C12N15/90
代理公司: 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 代理人: 董志勇
地址: 美国宾夕*** 国省代码: 美国;US
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摘要:
搜索关键词: 规律间隔 细胞施用 重复序列 成簇的 茎环 修饰
【权利要求书】:

1.基因编辑的方法,所述方法包括向细胞施用包括茎环成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)RNA(st-crRNA)的外源核酸和编码Cpf1酶的外源核酸。

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述细胞是T细胞。

3.根据权利要求2所述的方法,其中所述T细胞是原代T细胞。

4.根据权利要求1所述的方法,其中所述施用包括将所述外源核酸电穿孔入所述细胞。

5.根据权利要求4所述的方法,其中所述电穿孔进行多次。

6.根据权利要求1所述的方法,其中所述Cpf1酶包括氨基酸球菌属Cpf1(AsCpf1)。

7.根据权利要求1所述的方法,其中所述Cpf1酶包括毛螺菌属Cpf1(LbCpf1)。

8.根据权利要求1所述的方法,其中所述st-crRNA包括所述crRNA的3’端上的茎环结构。

9.根据权利要求1所述的方法,其中所述st-crRNA包括所述crRNA的5’端上的茎环结构。

10.根据权利要求9所述的方法,其中所述茎环结构进一步包括添加至所述茎环的5’端的三个甘氨酸残基。

11.根据权利要求10所述的方法,其中所述st-crRNA的原间隔区进一步包括部分磷硫酰化(PMS)修饰。

12.根据权利要求1所述的方法,其中所述基因编辑包括使选自以下的基因突变:TCRα链恒定区(TRAC)、TCRβ恒定区(TRBC)和β-2微球蛋白(B2m)。

13.通过基因编辑生成修饰的T细胞的方法,所述方法包括向细胞施用包括st-crRNA的外源核酸和编码Cpf1酶的外源核酸。

14.根据权利要求13所述的方法,其中所述T细胞是原代T细胞。

15.根据权利要求13所述的方法,其中所述施用包括将所述核酸电穿孔入所述T细胞。

16.根据权利要求15所述的方法,其中所述电穿孔进行多次。

17.根据权利要求13所述的方法,其中所述Cpf1酶包括氨基酸球菌属Cpf1(AsCpf1)。

18.根据权利要求13所述的方法,其中所述Cpf1酶包括毛螺菌属Cpf1(LbCpf1)。

19.根据权利要求13所述的方法,其中所述st-crRNA包括所述crRNA的3’端上的茎环结构。

20.根据权利要求13所述的方法,其中所述st-crRNA包括所述crRNA的5’端上的茎环结构。

21.根据权利要求20所述的方法,其中所述茎环结构进一步包括添加至所述茎环的5’端的三个甘氨酸残基。

22.根据权利要求21所述的方法,其中所述茎环结构进一步包括部分磷硫酰化(PMS)修饰。

23.根据权利要求13所述的方法,其中所述基因编辑包括使选自以下的基因突变:TCRα链恒定区(TRAC)、TCRβ恒定区(TRBC)和β-2微球蛋白(B2m)。

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