[发明专利]免疫比浊法测定钙结合蛋白S100家族成员的方法

说明书

基于单克隆抗体利用颗粒增强免疫比浊法(PETIA)测定生物样品中的钙卫蛋白(S100A8/A)异二聚体的存在的方法。该方法可以适用于自动标准分析仪，为临床检测粪便样品和提取物中钙卫蛋白提供了可靠的方法。该方法与商业双位点夹心ELISA法具有可比性。本发明的方法计算由钙离子与低分子量钙结合S100蛋白引起的自发凝集，如用常规PETIA所观察到的自发凝集。本方法可用于测定在粪便、尿液、血清、血浆、滑液和其他体液中的人钙卫蛋白的存在。尽管使用了不同的测量原理，但已证明与常规免疫分析(ELISA)间的计量学溯源性和高度互换性。

技术领域

本申请涉及用于定量测定体液和粪便中的钙结合蛋白S100家族成员的比浊法和检测系统。该检测试剂盒包含抗体、缓冲液以及用于诊断急性和慢性炎症疾病和病况的部件试剂盒。

背景技术

术语“钙卫蛋白(calprotectin)”包括相对分子量为36500道尔顿以及等电点为pH值6.3和6.5的两种粒细胞蛋白(US 4,833,074；Fagerhol et al.,Scand.J.Haematol.24,393-398(1980).Fagerhol et al.,Bull.Europ.Physiopath.Resp.16(suppl),273-281(1980)。别称包括低分子量S100A8和S100A9钙结合蛋白、髓系相关蛋白8(MRP8)、髓系相关蛋白14(MRP14)、转移抑制因子相关蛋白8/14(MRP8-MRP14)、S100a/b、钙粒蛋白A/B、囊性纤维化抗原(CFA)、人白细胞蛋白、白细胞L1蛋白复合物、60BB抗原和27E10抗原。钙卫蛋白已证实是中性粒细胞活化的标志物，因其在体液和材料中的浓度表征白细胞的周转和它们在组织中的浸润。因此，它已成为临床化学中广泛应用于感染、急性和慢性炎症及其他疾病的生物标志物。钙卫蛋白的测定可用于将细菌感染区分于其他原因，也可用于非感染性全身炎症的诊断(Striz,ITrebichavsky,Calprotectin-a pleiotropic molecule in acuteand chronic inflammation,Physiological research/Academia ScientiarumBohemoslovaca(2004)53(3):245-53；Nilsen T et al,A new turbidimetricimmunoassay for serum calprotectin for fully automatized clinical analysers,Journal of Inflammation(2015)12:45；Johne B et al,Functional and clinicalaspects of the myelomonocyte protein calprotectin,Mol.Pathol.1997；50:113-23；Nielsen T et al,Serum calprotectin levels in elderly males and femaleswithout bacterial or viral infections,Clin.Biochem2014；47(12):1065-8)。钙卫蛋白还进一步被提出是无症状受试者在出现心血管疾病(CVD)症状之前CVD的潜在标志物(参见EP 1 573 335B1)。