[发明专利]用于制备糖蛋白的细胞培养工艺

说明书

本申请提供了一种用于将多个批次的大豆水解产物针对所希望的量的其组分诸如鸟氨酸或腐胺进行筛选，并仅选择具有所希望的量的这种组分的那些批次的大豆水解产物的方法。本公开还提出了在补充有所选择批次的大豆的培养基中培养细胞的方法，以产生更一致、更高品质的批的目的蛋白。另外，本公开提供了多种蛋白制剂，其各自通过在补充有单独批次的含有所希望的量的鸟氨酸或腐胺的大豆水解产物的培养基中培养细胞而生产，由此所产生的每个批次的蛋白展现出改善的目的蛋白品质和所产生的优质蛋白的量。

序列表的并入

文件名为“REGE009P02US_SeqList.txt”的文本文件(创建于2018年2月1日，大小为11.2KB)的内容通过引用以其整体并入本文。

技术领域

本发明涉及用于细胞培养和重组蛋白生产的方法。本发明确切地涉及在含有大豆水解产物的培养基中培养细胞以实现高品质重组蛋白的一致生产的方法。

背景技术

含有蛋白质水解产物(诸如大豆水解产物)的细胞培养基通常用于从培养细胞中生产重组蛋白。但是，蛋白质水解产物可能包含会对细胞生长或重组蛋白质生产产生负面影响的化合物。尽管有这些缺点，蛋白质水解产物已被广泛用作细胞培养的补充剂。

人类生物治疗剂(生物药物)通常在哺乳动物细胞培养中生产。然而，生物治疗剂的品质和性能高度依赖于制造工艺。关于具有一致糖基化的生物药物的制造，将Tebbey,P.和Declerck,P.Generics and Biosimilars Initiative Journal(2016)5:2,第70-73页并入本文中。用于制造糖蛋白的细胞培养工艺的变化可能会导致糖基化模式、酸性物质(例如，唾液酸)的存在或蛋白质上聚糖的量的差异。Id.这种差异增加了作为结果的蛋白质生产中蛋白质亚型的异质性，这可以改变生物治疗剂的稳定性、功效或免疫原性，并最终导致该批蛋白质的不合格(rejection)。

因此，消除药品产量和组成的批之间差异的细胞培养方法是非常希望的。本公开鉴定了植物蛋白水解产物(例如，大豆水解产物)中的某些组分，这些组分可能因批次而异，并改变使用大豆水解产物进行的培养中产生的高品质糖蛋白的组成和产量。除了其他方面以外，本公开通过对植物蛋白水解产物的批次进行筛选并选择包含理想浓度的植物蛋白水解产物组分的批次用于生物药物的生产，从而解决改善细胞培养方法的需求。

发明内容

本公开部分基于大豆水解产物批次中的鸟氨酸或腐胺的浓度会影响使用大豆水解产物进行的细胞培养中产生的蛋白质的品质和组成这一发现。本公开还提供，在包含含有特定浓度的鸟氨酸或腐胺的大豆水解产物的培养基中培养的细胞产生更大量的高品质蛋白质，这些蛋白质展现出批之间更一致的糖基化模式、聚糖量和唾液酸图谱。

在一个方面，本发明涉及一种在包含大豆水解产物的细胞培养基中培养表达重组异源糖蛋白的细胞群以生产重组异源糖蛋白的方法，并且其中所述大豆水解产物包含≤0.067％(w/w)的鸟氨酸或腐胺。

在一些实施方案中，所述方法包括在包含大豆水解产物的细胞培养基中培养表达重组异源糖蛋白的细胞群的步骤，其中所述大豆水解产物含有≤0.67毫克(mg)鸟氨酸/克(g)大豆(w/w)，或约0.003％-0.067％(w/w)鸟氨酸。在一个实施方案中，所述培养基含有≤5mg/L鸟氨酸，或约0.6-3mg/L鸟氨酸。在一些实施方案中，所述细胞群是通过表达重组异源糖蛋白的细胞的克隆扩增而获得的。

在一个方面，本发明涉及一种用于生产糖蛋白的方法。在一个实施方案中，所述方法包括在含有大豆水解产物的培养基中培养表达重组异源糖蛋白的细胞群的步骤，所述大豆水解产物含有≤0.67毫克(mg)腐胺/克(g)大豆(w/w)，或约0.003％-0.067％(w/w)腐胺。在一个实施方案中，所述培养基含有≤5mg/L腐胺或约0.6-3mg/L腐胺。在一些实施方案中，所述细胞群是通过表达重组异源糖蛋白的细胞的克隆扩增而获得的。