[发明专利]层析

权利要求书

1.一种用于从包含产物生物分子和至少一种杂质的原料纯化该产物生物分子的工业规模的方法，该方法包括以下步骤：

a)将来自原料的进料加载到层析基质上，使得该产物生物分子结合层析基质；

b)通过将洗脱溶液施加到层析基质，将该产物生物分子在洗脱液中从层析基质洗脱；

其中所述洗脱液包含：

-包含纯化的产物生物分子的第一级分；和

-包含该产物生物分子和至少一种杂质的第二级分，所述第二级分包含一个或多个前导和/或尾部级分；

并且其中所述第一级分与第二级分分开收集；

c)将所述第二级分存放在一个或多个容器中；

d)将来自所述容器的第二级分和来自原料的另外的进料加载至层析基质，使得第二级分中的产物生物分子与层析基质结合；其中所述另外的进料与第二级分同时或序贯地加载；和

e)通过将洗脱溶液施加到层析基质来将该产物生物分子在洗脱液中从层析基质洗脱，其中所述洗脱液包含纯化的产物生物分子；

其中步骤(a)、步骤(b)、步骤(d)和步骤(e)中的层析基质为同一层析基质。

2.根据权利要求1的方法，其中重复步骤(b)、(c)和(d)。

3.根据权利要求1的方法，其中将步骤(b)、(c)和(d)至少实施两次。

4.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述第二级分包含：(i)紧接在第一级分之前的前导级分；和/或(ii)紧接在第一级分之后的尾部级分。

5.根据前述权利要求中任一项的方法，其中：

-将步骤(a)和(b)重复多次；

-将每个步骤(b)中收集的第二级分汇集在一起；

-步骤(c)包括将汇集的第二级分存放在所述容器中；

和

-步骤(d)包括将汇集的第二级分从所述容器加载至所述层析基质，使得汇集的第二级分中的产物生物分子结合所述层析基质。

6.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述步骤(a)还包括收集含有未结合层析基质的未结合产物生物分子的流通液；且步骤(d)还包括将所述流通液与第二级分和/或另外的进料同时或序贯地加载到层析基质中。

7.根据前述权利要求中任一项的方法，其还包括处理第二级分以促进所述生物分子与层析基质的结合。

8.根据权利要求7的方法，其中所述处理在步骤(c)和/或步骤(d)期间进行。

9.根据权利要求7或权利要求8的方法，其中所述处理包括改变所述第二级分的pH、离子强度、浓度、温度和/或溶剂和/或将所述第二级分混合和/或脱气。

10.根据前述权利要求中任一项的方法，其还包括测试所述第二级分。

11.根据权利要求10的方法，其中所述测试第二级分包括测定第二级分中所述产物生物分子的一个或多个浓度；杂质的浓度；杂质的身份；pH；离子强度；温度；溶剂；和/或气体浓度。

12.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述步骤(c)包括将所述第二级分存放至少5分钟。

13.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述步骤(c)包括将所述第二级分存放过夜。

14.根据权利要求12或权利要求13的方法，其中在存放时间期间将所述层析基质交换、清洁或更新。

15.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述产物生物分子是蛋白质、抗体、抗体片段、多核苷酸或多肽。

16.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述原料具有至少20升，任选地至少100升的体积。