[发明专利]烟酰胺单核苷酸的制造方法及该方法所使用的转化体在审
| 申请号： | 201880054836.6 | 申请日： | 2018-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN111051520A | 公开（公告）日： | 2020-04-21 |
| 发明（设计）人： | 秋山卓理 | 申请（专利权）人： | 三菱化学株式会社 |
| 主分类号： | C12P19/32 | 分类号： | C12P19/32;C12N1/21;C12N9/00;C12N9/10;C12N9/12;C12N1/19 |
| 代理公司： | 北京银龙知识产权代理有限公司 11243 | 代理人： | 陈彦;张默 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 烟酰胺单 核苷酸 制造 方法 使用 转化 | ||
1.一种烟酰胺单核苷酸(NMN)的制造方法，其包括下述工序：使烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)、磷酸核糖焦磷酸合成酶(Prs)及多磷酸激酶(Ppk)这三种酶的表达被强化而得的转化体、表达所述三种酶而得的无细胞蛋白质合成反应液、或它们的处理物与核糖-5-磷酸(R5P)、烟酰胺(NAM)、ATP及多磷酸接触。
2.根据权利要求1所述的NMN的制造方法，其进一步包括下述工序：使核糖激酶(Rbk)及多磷酸激酶(Ppk)这两种酶的表达被强化而得的转化体、表达所述两种酶而得的无细胞蛋白质合成反应液、或它们的处理物与核糖、ATP及多磷酸接触来制造所述R5P。
3.根据权利要求1或2所述的NMN的制造方法，在转化体实质上不增殖的条件下进行。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的NMN的制造方法，所述Nampt来源于细菌。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的NMN的制造方法，所述Ppk为多磷酸激酶2型家族。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的NMN的制造方法，所述转化体的宿主为大肠杆菌、棒状杆菌属细菌、红球菌属细菌或酵母。
7.一种转化体，其是烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)、磷酸核糖焦磷酸合成酶(Prs)及多磷酸激酶(Ppk)这三种酶的表达被强化而得的转化体。
8.一种转化体，其是核糖激酶(Rbk)及多磷酸激酶(Ppk)这两种酶的表达被强化而得的转化体。
9.一种烟酰胺单核苷酸(NMN)的制造方法，其包括下述工序：在焦磷酸酶(PPase)的存在下，使烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)的表达被强化而得的转化体、表达所述酶而得的无细胞蛋白质合成反应液、或它们的处理物与烟酰胺(NAM)及磷酸核糖焦磷酸(PRPP)接触。
10.根据权利要求9所述的NMN的制造方法，在转化体实质上不增殖的条件下进行。
11.根据权利要求9或10所述的NMN的制造方法，所述处理物为精制酶。
12.一种NMN的制造方法，其包括下述工序：
使转化体或它们的处理物至少与烟酰胺(NAM)接触，所述转化体是对分类为(d)EC3.5.1.42所示的EC编号的酶进行编码的基因和对分类为以下(a)、(c)、(g)、(h)、(i)所示的任意一个以上EC编号的酶进行编码的基因被破坏或缺失、并且烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)的表达被强化而得的转化体，
(a)EC 3.1.3.5
(c)EC 2.4.2.1
(g)EC 3.2.2.1
(h)EC 3.2.2.3
(i)EC 3.2.2.14。
13.根据权利要求1～12中任一项所述的NMN的制造方法，反应体系中添加的ATP、ADP和AMP各摩尔数的总和为生成的NMN的摩尔数的0.5当量以下。
14.一种NMN的制造方法，其是烟酰胺单核苷酸(NMN)的制造方法，包括下述工序：使烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)及磷酸核糖焦磷酸合成酶(Prs)这两种酶的表达被强化而得的转化体、表达所述两种酶而得的无细胞蛋白质合成反应液、或它们的处理物与核糖-5-磷酸(R5P)、烟酰胺(NAM)及ATP接触，
反应体系中添加的ATP、ADP和AMP各摩尔数的总和为生成的NMN的摩尔数的0.5当量以下。
15.根据权利要求14所述的NMN的制造方法，其进一步包括下述工序：使核糖激酶(Rbk)的表达被强化而得的转化体、表达所述酶而得的无细胞蛋白质合成反应液或它们的处理物与核糖及ATP接触来制造所述R5P。
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