[发明专利]具有D-阿洛酮糖3-差向异构酶活性的多肽和编码其的多核苷酸

说明书

本发明涉及具有D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶活性的分离的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用这些多肽的方法。

序列表的引用

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发明背景

技术领域

本发明涉及具有D-阿洛酮糖3-差向异构酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用这些多肽的方法。

背景技术

单糖D-阿洛酮糖，也称为阿卢糖，是果糖的异构体。就甜度而言，D-阿洛酮糖与D-果糖类似。然而，与D-果糖不同，D-阿洛酮糖在人体中几乎是不可代谢的，并且因此其卡路里值几乎为零。因此，D-阿洛酮糖作为饮食甜味剂是有吸引力的。

D-阿洛酮糖以非常少的量天然存在于，例如，食用蘑菇、菠萝蜜、小麦和鼠刺(Itea)植物中，并且难以化学合成。

本领域需要开发用于高效产生D-阿洛酮糖的方法。通过由阿洛酮糖3-差向异构酶催化的酶的差向异构化作用而进行的D-果糖和D-阿洛酮糖之间的相互转化是用于产生D-阿洛酮糖的有吸引力的方式。

本发明提供了具有D-阿洛酮糖3-差向异构酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。

发明内容

本发明涉及具有D-阿洛酮糖3-差向异构酶活性的分离的多肽，这些分离的多肽选自下组，该组由以下组成：

(a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的多肽具有至少70％序列同一性的多肽；

(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常高严格条件下与以下杂交：(i)SEQID NO:1或SEQ ID NO:3的多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补体；

(c)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的多肽编码序列具有至少70％序列同一性；

(d)SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的多肽的变体，该变体在一个或多个(例如，若干个)位置处包含取代、缺失和/或插入；以及

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段，该片段具有D-阿洛酮糖3-差向异构酶活性。

本发明还涉及编码本发明的多肽的分离的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、重组表达载体、和重组宿主细胞；以及产生这些多肽的方法。

本发明还涉及用于产生D-阿洛酮糖的方法，该方法包括：(a)在适于多肽将D-果糖转化成D-阿洛酮糖的条件下，使包含本发明的具有D-阿洛酮糖3-差向异构酶的多肽的组合物与D-果糖接触；和任选地(b)回收所产生的D-阿洛酮糖。

附图说明

图1显示了温度对通过象粪宏基因组D-阿洛酮糖3-差向异构酶将果糖转化为D-阿洛酮糖的影响。

图2显示了温度对通过厌氧海泥宏基因组D-阿洛酮糖3-差向异构酶将果糖转化为D-阿洛酮糖的影响。

定义

等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。