[发明专利]用于高通量测序的快速文库构建

权利要求书

1.制备高通量测序文库的方法，其包含以下步骤：

A.从多个多核苷酸中产生双链片段；

B.使片段的末端绽裂以暴露单链区域；

C.使寡核苷酸探针与单链区域杂交以形成双链双链体，其中探针包含可切割的：

(1)5'化学活性基团；

(2)3'化学活性基团；或

(3)5'和3'化学活性基团；以及

其中所述探针的长度至少等于绽裂片段的暴露的单链区域；

D.使所述双链双链体与至少一种切割剂接触以切割化学活性基团，以在双链双链体中产生单链3'悬突、单链5'悬突，或单链3'和5悬突；以及

E.将至少两组双链DNA接头连接至所述双链双链体，其中

(1)第一组接头中的接头包括以下中的至少一种：

i.与双链双链体的3'单链悬突的悬突末端互补的3'悬突，如果存在的话；或者

ii.与双链双链体的5'单链悬突的悬突末端互补的5'悬突，如果存在的话，

和

(2)第二组接头中的接头包括以下中的至少一种：

i.与双链双链体的3'单链悬突的悬突末端互补的3'悬突，如果存在的话；

ii.与双链双链体的5'单链悬突的悬突末端互补的5'悬突，如果存在的话，或者

iii.连接到双链双链体的平末端的平末端，如果存在的话。

2.根据权利要求1所述的制备高通量测序文库的方法，其中：所述探针包含5'化学活性基团；

所述至少一种切割剂切割5'化学活性基团；

所述第一组接头中的接头包含与双链双链体的3'单链悬突的悬突末端互补的3'悬突；

所述第二组接头包含连接至双链双链体的平末端的平末端。

3.根据权利要求1所述的制备高通量测序文库的方法，其中：所述探针包含3'化学活性基团；

所述至少一种切割剂切割3'化学活性基团；

所述第一组接头中的接头包含与双链双链体的所述5'单链悬突的悬突末端互补的5'悬突；

所述第二组接头包含连接至双链双链体的平末端的平末端。

4.根据权利要求1所述的制备高通量测序文库的方法，其中：所述探针包含3'和5'化学活性基团；

至少一种切割剂切割3'化学活性基团，并且至少一种切割剂切割5'化学活性基团；

所述第一组接头中的接头包含与双链双链体的5'单链悬突的悬突末端互补的5'悬突；

所述第二组接头包含与双链双链体的3'单链悬突的悬突末端互补的3'悬突。

5.根据权利要求1所述的方法，其中双链多核苷酸片段是随机产生的。

6.根据权利要求5所述的方法，其中双链多核苷酸片段是酶促产生的。

7.根据权利要求5所述的方法，其中双链多核苷酸片段是通过超声破碎产生的。

8.根据权利要求5所述的方法，其中双链多核苷酸片段的长度为50-1000个碱基对(bp)。

9.根据权利要求8所述的方法，其中双链多核苷酸片段的长度为100-800bp。

10.根据权利要求1所述的方法，其中绽裂片段的暴露的单链区域的长度为6-12个核苷酸。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述寡核苷酸探针包含：脱氧核苷酸(dNTP)；dNTP/三磷酸核糖核苷酸(rNTP)杂交体；肽核酸(PNA)；锁核酸(LNA)；异鸟苷(isoG)；异胞嘧啶(isoC)；或它们的任意组合。

12.根据权利要求1或11所述的方法，其中所述寡核苷酸探针还包含硫代磷酸酯键。