[发明专利]拉曼成像技术测定抗生素敏感性的方法

权利要求书

1.一种用于测定细菌对抗生素敏感性的方法，其特征在于，包括：

制备细菌固定化凝胶；在具有营养源的培养基中培养所述细菌；

将预选的抗生素添加到所述培养基中；

将所述抗生素和细菌在培养基中孵育一段预定的时间以形成样品；

离心所述样品；

洗涤所述样品；

将所述样品沉积在所述细菌固定化凝胶上；

通过相干拉曼显微镜在所述细菌固定化凝胶上收集样品的图像。

2.根据权利要求1所述的用于测定细菌对抗生素敏感性的方法，其特征在于，通过超光谱相干拉曼显微镜采集样品图像。

3.根据权利要求1所述的用于测定细菌对抗生素敏感性的方法，其特征在于，通过单频相干拉曼显微镜采集样品图像。

4.根据权利要求1所述的用于测定细菌对抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述固定化凝胶由琼脂糖凝胶组成。

5.根据权利要求1所述的用于测定细菌对抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述营养源具有单一的碳源，所述营养源仅由0.1-10％的葡萄糖-d7组成。

6.根据权利要求1所述的用于测定细菌对抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述营养源由含有0-100％二氧化氘的培养基组成。

7.根据权利要求1所述的用于测定细菌对抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述营养源由葡萄糖-d7和二氧化氘组成。

8.根据权利要求1所述的用于测定细菌对抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述拉曼显微镜收集样品的图像为拉曼成像，所述拉曼成像可以是受激拉曼散射成像、相干反斯托克斯拉曼散射成像或相干拉曼诱导的克尔效应成像。

9.一种用于收集抗生素敏感性测试图像的超光谱受激拉曼散射成像设备，其特征在于，所述设备包括：

具有80MHz重复率的双输出飞秒脉冲激光器，所述双输出飞秒脉冲层包括：

泵浦光束；

斯托克斯光束；

所述斯托克斯光束路径由声光调制器调制；

所述泵浦光束路径具有平移台以调谐所述泵浦光束和所述斯托克斯光束之间的延迟；

组合器，所述组合器用于组合所述泵浦光束和所述斯托克斯光束；

激光扫描显微镜，所述激光扫描显微镜具有用于将泵浦光束和斯托克斯光束聚焦在样品上的物镜；

油冷凝器，所述油冷凝器用于从所述样品收集激光；

滤光器，所述滤光器位于所述聚光器之后，并且用于滤除所述斯托克斯光束；

光电二极管，所述光电二极管位于滤光器之后，用于检测泵浦光束；

锁定放大器，所述锁定放大器用于提取泵浦光束信号损耗。

10.根据权利要求9所述的用于收集抗生素敏感性测试图像的超光谱受激拉曼散射成像设备，其特征在于，还包括啁啾装置，所述啁啾装置用于在斯托克光束和泵浦光束之间形成不同的脉冲持续时间。

11.根据权利要求10所述的用于收集抗生素敏感性测试图像的超光谱受激拉曼散射成像设备，其特征在于，所述啁啾装置是两个15厘米长的SF57玻璃棒

12.根据权利要求9所述的用于收集抗生素敏感性测试图像的超光谱受激拉曼散射成像设备，其特征在于，使用一对滤光片。

13.根据权利要求9所述的用于收集抗生素敏感性测试图像的超光谱受激拉曼散射成像设备，其特征在于，所述激光扫描显微镜的物镜为60倍的水物镜。

14.根据权利要求9所述的用于收集抗生素敏感性测试图像的超光谱受激拉曼散射成像设备，其特征在于，所述泵浦光束的脉冲持续时间在1.5和2ps之间，所述斯托克斯光束的脉冲持续时间在1.0和1.4ps之间。