[发明专利]用于增加芽胞杆菌属中蛋白质产生的经修饰的5′-非翻译区(UTR)序列

权利要求书

1.一种分离的多核苷酸，其包含源自野生型枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)aprE5′-非翻译区(WT-5′-UTR)核酸序列SEQ ID NO:1的经修饰的枯草芽孢杆菌aprE 5′-非翻译区(mod-5′-UTR)核酸序列。

2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述mod-5′-UTR包含SEQ ID NO:2。

3.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述mod-5′-UTR进一步包含位于所述mod-5′-UTR的5′并有效地连接到所述mod-5′-UTR的上游(5′)启动子区核酸序列。

4.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述mod-5′-UTR进一步包含编码目的蛋白的下游(3′)可读框(ORF)核酸序列，其中所述ORF序列位于所述mod-5′-UTR的3′并有效地连接到所述mod-5′-UTR。

5.如权利要求1所述的多核苷酸，其包含按5′至3′方向的式(I)：

(I)：[Pro][mod-5′-UTR][ORF]；

其中[Pro]是在芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)细胞中有效的启动子区核酸序列，[mod-5′-UTR]是经修饰的枯草芽孢杆菌aprE 5′非翻译区(mod-5′-UTR)核酸序列，并且[ORF]是编码目的蛋白(POI)的可读框核酸序列，其中所述[Pro]、[mod-5′-UTR]和[ORF]核酸序列是有效地连接的。

6.一种载体，其包含如权利要求1所述的多核苷酸。

7.一种DNA表达构建体，其包含如权利要求1所述的多核苷酸。

8.一种芽孢杆菌属物种细胞，其包含如权利要求1所述的多核苷酸。

9.如权利要求8所述的芽孢杆菌属物种细胞，其中所述细胞是地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)细胞。

10.一种分离的多核苷酸，其包含源自野生型芽孢杆菌属物种5′-UTR(WT-5′-UTR)序列的经修饰的芽孢杆菌属物种5′-UTR(mod-5′-UTR)核酸序列，所述分离的经修饰的多核苷酸包含按5′至3′方向以有效组合的式(II)的核酸序列：

(II)：[TIS][mod-5′UTR][tss密码子]

其中[TIS]是转录起始位点(TIS)，[mod-5′-UTR]包含经修饰的枯草芽孢杆菌5′-UTR核酸序列，并且[tss密码子]是三(3)核苷酸翻译起始位点(tss)密码子。

11.如权利要求10所述的多核苷酸，其中所述[mod-5′-UTR]序列包含SEQ ID NO:2。

12.如权利要求10所述的多核苷酸，其进一步包含：

(a)位于所述[TIS]的上游(5′)并有效地连接到所述[TIS]的核酸启动子序列，该启动子序列在芽孢杆菌属物种细胞中是有效的，以及

(b)位于所述tss密码子的下游(3′)并有效地连接到所述tss密码子的ORF核酸序列，其中所述ORF序列编码POI。

13.一种载体，其包含如权利要求10所述的多核苷酸。

14.一种DNA表达构建体，其包含如权利要求10所述的多核苷酸。

15.一种芽孢杆菌属物种细胞，其包含如权利要求10所述的多核苷酸。

16.如权利要求15所述的芽孢杆菌属物种细胞，其中所述细胞是地衣芽孢杆菌细胞。