[发明专利]用于安全诱导针对RSV的免疫的方法

说明书

本发明涉及在有需要的人受试者中诱导针对呼吸道合胞病毒(RSV)的安全免疫应答的方法，该方法包括向受试者施用包含重组腺病毒和药学上可接受的载体的组合物，该重组腺病毒包含编码RSV融合(F)蛋白的核酸，该RSV融合(F)蛋白包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，该组合物的总剂量为从约1x 10¹⁰至约2x 10¹¹病毒颗粒(vp)。

技术领域

本发明涉及用于安全诱导针对RSV的有效免疫的方法。特别地，本发明涉及表达RSV F蛋白的腺病毒血清型26表达载体，其在人受试者中提供针对多种RSV毒株的免疫的安全诱导。

背景技术

呼吸道合胞病毒(RSV)是一种高度传染性的儿童呼吸道病原体，据信其致约200,000例儿童死亡/年。在2岁以下的儿童中，RSV占因呼吸道感染而住院的约50％，其中住院高峰发生在2-4月龄。据报道，几乎所有儿童到两岁时都会经历RSV感染，并且一生中反复感染归因于低的自然免疫力。在老年人中，RSV疾病负担与由非大流行性A型流感感染引起的那些相似。

RSV是一种属于肺病毒亚科的副粘病毒。它的基因组编码各种蛋白，包括称为RSV糖蛋白(G)和RSV融合蛋白(F)的膜蛋白，它们是用于中和抗体的主要抗原靶标。

与RSV G蛋白不同，F蛋白在RSV毒株之间是保守的；这使它成为一种有吸引力的疫苗候选物，能够引发广泛地中和性抗体。F蛋白是跨膜蛋白，并且在病毒出芽期间从细胞膜掺入病毒体膜中。RSV F蛋白通过融合病毒和宿主细胞膜促进感染。在融合过程中，F蛋白从不稳定的融合前构象不可逆地再折叠成稳定的融合后构象。蛋白前体F0在细胞内成熟期间需要通过弗林蛋白酶样蛋白酶进行切割。有两个弗林蛋白酶位点，切割这两个位点导致p27肽的去除和两个结构域的形成：N末端F2结构域和C末端F1结构域(图1)。F2和F1结构域通过两个胱氨酸桥连接。针对该融合蛋白的抗体可以防止细胞中的病毒吸收，并且因此具有中和作用。除了作为用于中和抗体的靶标外，RSV F还含有细胞毒性T细胞表位(Pemberton等人，1987，J.Gen.Virol.[基因病毒学杂志]68:2177-2182)。

尽管进行了50年的研究，仍然没有针对RSV的许可疫苗。疫苗开发的一个主要障碍是20世纪60年代临床试验中使用福尔马林灭活的(FI)RSV疫苗的疫苗强化疾病的遗留问题。FI-RSV接种疫苗的儿童未能免受自然感染的影响，并且受感染的儿童比未接种疫苗的儿童患有更严重的疾病，其中包括两人死亡。这种现象被称为“强化疾病”。

自从使用FI-RSV疫苗进行试验以来，已经开始探索产生RSV疫苗的各种方法。尝试包括RSV的经典活减毒冷传代的或温度敏感性突变毒株、(嵌合的)蛋白亚单位疫苗、肽疫苗和由重组病毒载体(包括腺病毒载体)表达的RSV蛋白。尽管这些疫苗中的一些显示出有希望的临床前数据，但由于安全性考虑或缺乏疗效，没有疫苗被许可用于人。

最有效的RSV中和抗体与RSV F蛋白上的特定位点(位点零)结合，该特定位点只有当RSV蛋白处于其融合前构象时才暴露，这使得该特定构象作为疫苗抗原非常有吸引力。然而，处于融合前构象的F蛋白非常不稳定，并且容易发生向融合后构象的主要构象转变。由于它的不稳定性，融合前构象因此倾向于过早重折叠成稳定融合后构象。这种现象是在溶液中和在病毒体表面上的蛋白的固有特征。

基于RSV F蛋白的疫苗候选物由于例如稳定性、纯度、可再现性和效力的问题而失败。事实上，尽管为生产针对含有融合前形式的RSV F蛋白的RSV的疫苗做了很多努力，但尚未描述在人体中测试过的稳定的融合前RSV F多肽。

因此，仍然需要安全且有效的疫苗和针对RSV的疫苗接种方法。本发明的目的是提供这类用于以安全的方式接种针对RSV的疫苗的方法。

发明内容

根据本发明，第一次证明了表达以融合前构象稳定化的RSV F蛋白的重组腺载体，当将其施用于人受试者时，诱导出针对RSV的安全有效的(免疫原性)免疫应答。