[发明专利]pH敏感性脂质体及其制造方法

说明书

pH敏感性脂质体的制造方法包含：在加温条件下将二元醇、三元以上的多元醇和脂质体膜构成成分混合，制备在二元醇和多元醇的混合物中溶解脂质体膜构成成分而成的混合物溶液的工序；将该混合物溶液和预先加温的水性介质混合，并将它们均质化的工序；将均质化的水性介质进行骤冷，生成脂质体的工序；回收生成的脂质体的工序。利用本发明的方法，可使目前为止不稳定且难以制备的pH敏感性脂质体稳定化，并通过简便的方法制备pH敏感性脂质体。

本申请主张基于2017年9月4日在日本国提出申请的日本特愿2017-169356号和日本特愿2017-169359号的优先权，该申请记载的全部内容通过参照而直接援引于本说明书。另外，本申请中引用的全部专利、专利申请和文献中记载的全部内容通过参照而直接援引于本说明书。

技术领域

本发明涉及pH敏感性脂质体及其制造方法，更详细而言，涉及在二元醇和三元以上的多元醇的混合物中添加脂质体的膜构成成分并溶解而得到的pH敏感性脂质体及其制造方法。

背景技术

脂质体作为用于将生物学活性分子传递至细胞质内的载体受到关注。使用脂质体的药剂传递中的主要课题在于，由于通常的脂质体中膜融合性低，因此，在向细胞质内转移后，内含于脂质双分子膜的药剂的释放慢。为了解决该问题，开发一种pH敏感性脂质体，其在生理的条件下稳定，并且转移至细胞质内后，在酸性条件下变得不稳定。例如，报告了使用磷脂酰乙醇胺型磷脂的脂质体的磷脂酰乙醇胺型磷脂与pH响应而使集合结构转移，在酸性环境(pH5以下)释放内含物(例如参照非专利文献1)。

另一方面，报告了使含有阳离子性亲水亲油性分子和阴离子性亲水亲油性分子和两性亲水亲油性分子的至少1种作为构成脂质的脂质体分散于水性介质中时，在酸性pH环境下，该脂质体具有正的Zeta电位，且在碱性pH环境下，该脂质体具有负的Zeta电位，该Zeta电位伴随该分散液的pH的增加，从正向负变化时，释放保持的目的物质(例如参照专利文献1)。

作为脂质体的制法，有超声波法、挤出法(Extrusion Method)、French压力法(French Press)、均质化法、乙醇注入法等各种方法，但在典型的脂质体的工业制造方法中，包括一边搅拌溶解于水混合性有机溶剂的磷脂等脂质成分一边注入添加于水溶液的方法。该方法可使用甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等醇类作为水混合性有机溶剂，但为了维持脂质的溶解状态，需要一边将脂质溶液加温，一边添加混合于水溶液；需要精密控制温度、添加速度或搅拌速度(参照专利文献2)。

另外，报告了以特定的重量比含有卵磷脂、胆固醇和甘油三酯的脂质体，即使不进行均质高压处理等工序，也可以仅通过在常见的混合中需要的搅拌而形成(参照专利文献3)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第5588619号公报

专利文献2：日本特表2006-517594号公报

专利文献3：日本特开2017-66059号公报

非专利文献1：Duzgunes N,Straubinger RM,Baldwin PA,Friend DS,PapahadjopoulosD.Proton-induced fusion of oleic acid-phosphatidylethanolamineliposomes.Biochemistry.1985 24(13)：3091-3098.

发明内容

发明所要解决的问题

但是，这样的pH敏感性脂质体通常不稳定，因此存在难以将水性介质中的Zeta电位成为零的pH值设定为所期望的范围，即难以在从酸性到碱性的广泛的范围内任意地设定脂质体的膜融合性；不能对应对pH敏感性脂质体具有的潜在用途的期待的问题。另外，由于pH敏感性脂质体与通常的脂质体相比不稳定，因此，其工业制造困难，谋求简便且稳定化的pH敏感性脂质体的制造方法。