[发明专利]CD1D限制性NKT细胞作为即用型癌症免疫治疗的平台

说明书

本公开的实施方案包括用于免疫治疗的方法和组合物，其包含能够在宿主个体中普遍耐受的同种异体细胞。在具体的实施方案中，细胞具有降低的内源性β2‑微球蛋白(B2M)和/或MHC II类相关恒定链(Ii)的表达，并且在特定情况下，细胞是缺乏破坏宿主组织的能力的NKT细胞，具有大大降低的宿主免疫细胞识别，并且出乎意料地避免宿主NK细胞的破坏。在一些实施方案中，B2M‑和/或Ii‑靶向分子被工程化以与重组工程化受体组合(包括在单一构建体内)表达，例如，用于普遍耐受的即用型免疫治疗的一次成功产生。

本申请要求2017年8月11日提交的申请号为17185992.9的EP申请的优先权，其通过引用整体并入本文。

技术领域

本公开至少涉及细胞生物学、分子生物学、免疫学和医学领域。

背景技术

使用自体肿瘤特异性T细胞的癌症免疫疗法。分离和扩增肿瘤特异性T细胞然后输注(过继转移)回到患者的策略是癌症治疗中具有前景的方式。这种治疗在一些黑素瘤患者中已经是成功的，黑素瘤患者在输注自体黑素瘤特异性T细胞后可以具有完全和持续的肿瘤消退(1)。然而，作为其他免疫原性较低的恶性肿瘤的治疗，T细胞治疗受限于缺乏能够引发强烈T细胞反应的分子定义的肿瘤抗原，以及难以从肿瘤宿主中分离这些T细胞。

使用CAR重定向的自体T细胞的癌症免疫疗法。用嵌合抗原受体(CAR)对T细胞进行重定向抗原特异性的遗传修饰是产生用于过继治疗的效应细胞的一种策略，其不依赖于预先存在的抗肿瘤T细胞免疫。最近的临床试验表明，重定向到CD19抗原的T细胞可以诱导B细胞白血病和淋巴瘤患者的持续完全反应(2-7)。然而，由于疾病和化疗的影响，从淋巴瘤患者获得的T细胞的增殖能力降低。产品制造过程中T细胞扩增的减少意味着只有25％的新诊断和少至12.5％的治疗的小儿淋巴瘤患者可以输注自体CD19 CAR T细胞(8)。与淋巴瘤患者相似，T细胞数量和功能的不足在许多种癌症患者中是常见的(9-12)。克服该限制的一种方法是使用从用肿瘤特异性CAR修饰的健康个体获得并离体扩增的T细胞给癌症患者输注。然而，除一小部分患者适于同种异体干细胞移植外，HLA不匹配的T细胞不能使用，因为它们会引起移植物抗宿主病(GvHD)和/或被患者的免疫系统排斥。

T细胞中TCR的基因缺失用以避免GvHD。Qasim等使用基因编辑同时向T细胞引入CAR并破坏TCR，证明了从一种不匹配的健康供体产生GvHD不能的CAR T细胞的方法(13)。在该研究中，使用转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)技术引入脱靶基因改变，从T细胞基因组中删除了TCR基因(13)。

自然杀伤T细胞(NKT)具有抗肿瘤效应物功能并且天然地避免GvHD。NKT是先天性淋巴细胞的进化保守亚群，其特征在于不变的TCRα链Vα24-Jα18的表达以及对由单态类HLAI类分子CD1d呈递的糖脂的反应性(14-17)。NKT具有许多抗肿瘤特性，据报道它们的数量与几种癌症的良好预后相关(18)。Heczey A.等和Gian T.等证明NKT可以从外周血中分离，用CAR转导并扩增到临床规模用于过继细胞治疗应用(19,20)。一些研究已经表明，供体来源的NKT不介导GvHD，甚至可能抑制GvHD(21,22)。因此，同种异体的健康供体来源的CAR NKT可用于治疗癌症患者，而没有GvHD风险，与T细胞相比，不需要额外的遗传操作。

通过宿主免疫系统消除同种异体治疗细胞。所有正常有核细胞均表达HLA I类，因此宿主免疫系统将消除来自HLA不匹配供体的过继转移的治疗细胞。T和NKT细胞在活化时也可以瞬时表达HLA II类，并且HLA II类的不匹配通过宿主CD4 T细胞触发供体细胞消除。延迟这种排斥的常用方法是使用免疫抑制宿主调节以允许效应细胞在宿主免疫系统恢复之前介导抗肿瘤活性的治疗窗口。然而，这种方法对患者有毒，并且由于治疗效应细胞的持久性不足而可能不允许完全的肿瘤控制。