[发明专利]气味的定量方法、其所使用的细胞及该细胞的制造方法

说明书

本发明的目的在于提供下述方法，所述方法构建使多个受体在各个不同的贯通孔内的核酸上的真核细胞中表达的装置，在装置的各贯通孔内收纳多个真核细胞并使受体表达，对基于被测物质的对多个各受体的活化度进行一并测定，并将其作为具体的数值进行评价。阵列，其包含基板、和前述基板上的疏水性被膜，前述疏水性被膜具有多个贯通孔，在前述贯通孔的内部，以与前述基板接触的方式设置有含有编码规定的受体的基因的核酸。

技术领域

本发明涉及气味的定量方法、及该方法所使用的细胞。

背景技术

受体与细胞外的物质(配体)发生作用而引发信息传递。受体根据配体、功能而存在各种类型，关于受体与配体的应答性，尚未充分地查明。另外，通过近年来的基因分析，在受体中还发现了结构相似但其功能不明确的蛋白质，也存在被称为孤儿受体的物质。

在研究受体与配体的关系方面，期待将具有不同的遗传信息的规定的受体逐一配置而成的受体阵列、和使规定的配体同时作用于阵列并测定受体的应答性的测定技术的确立。

各种受体中，尤其是当着眼于嗅觉受体时，动物利用称为鼻的器官辨识外界的气味信息，并对其进行识别。其识别能力非常高，经训练的动物(包括人)还可识别出利用气相色谱等检测仪器无法检测到的气味物质的气味。若能模仿这样的经训练的动物所具有的高度发达的气味辨识机制并将其检测装置化，则可创造出采用现有的气相色谱等检测仪器的检测装置无法实现的、能够高灵敏度地对各种气味进行识别的气味检测装置。

嗅觉受体是嗅神经细胞中表达的7次跨膜型受体的1种，在嗅觉受体的细胞内区域中，与G蛋白进行相互作用。当自细胞外存在由气味分子引起的刺激时，嗅觉受体成为活化状态，接着，细胞内作为G蛋白的一种的Gαolf蛋白质被活化。该Gαolf使腺苷酸环化酶活化，以ATP作为原料而使cAMP在嗅神经细胞内蓄积。然后，cAMP与位于嗅神经细胞的细胞膜上的环核苷酸门控离子通道(CNG)结合而使其开口，钙离子经由CNG而流入细胞内，结果，细胞内的钙离子浓度升高。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开公报WO03/100057小册子

发明内容

发明要解决的课题

在为了研究与细胞外的配体的作用而将受体装置化的情况下，以往尚未确立以可测定受体的活化程度的形态将多达数百种的受体构建为1个装置的技术。

例如，受体为嗅觉受体的情况下，由于气味分子与在处于鼻腔内的嗅神经细胞的表面表达的被称作嗅觉受体的蛋白质结合，在嗅神经细胞内引发信息传递，气味信息被传递至脑内。就嗅觉受体而言，由基因组分析认为人类中存在约400种、小鼠中存在约1100种，可以理解为针对特定的气味分子，某嗅觉受体组以不同的程度活化，这些刺激被传递至脑中进行组合，由此在脑内识别各种气味。

然而，为了创造出如上所述的能够高灵敏度地对各种气味进行识别的气味检测装置，需要构建下述系统：使上述的多达约400种(或1100种)嗅觉受体全部以能实际发挥其功能的状态、在嗅神经细胞以外的多个培养细胞中于各个细胞上表达，并可对各嗅觉受体相对于气味刺激的活化程度进行具体比较。

然而，受体为嗅觉受体的情况下，尚未确立以适合测定受体的活化程度的水平(即，向细胞表层的呈递、充分的表达量、与细胞内信息传递蛋白质的高效率的共轭状态的维持)表达嗅觉受体的细胞。

另外，尚未确立含有用于表达这样的嗅觉受体的外源基因的载体。

另外，关于测定系统，由于即使在表达相同受体的细胞中以1个细胞单位进行观察时上述水平也不均匀，因此也尚未确立以高精度测定受体的活化程度的方法。

此外，也尚未确立使装置整体一并地测定多达数百种受体的活化程度的测定技术。