[发明专利]干细胞衍生的胰腺β细胞的重聚

说明书

本申请公开了类似于内源性胰岛的功能和特征的细胞簇，以及用于制备和使用这样的细胞簇的方法。本公开内容提供了包含至少一种非天然胰腺β细胞的体外细胞簇，其在暴露于葡萄糖负荷时表现出体外葡萄糖刺激的胰岛素分泌应答，其中所述细胞簇是未分选的细胞簇，并且其中细胞簇包含：至少35％的表达NKX6.1和C肽的细胞；至少的70％表达嗜铬粒蛋白A的细胞；至多约2％的表达SOX2的细胞；或至多约10％的表达SOX9的细胞。在一些情况下，当移植到受试者中时，体外细胞簇对受试者中的葡萄糖负荷表现出体内葡萄糖刺激的胰岛素分泌应答。

交叉引用

本申请要求于2017年7月21日提交的美国临时申请号62/535,659的权益，该申请通过引用整体并入本文。

背景技术

胰腺或胰岛移植已被用于治疗糖尿病，如I型糖尿病。胰岛移植不需要进行大手术，并且胰岛移植物的功能可以在接受者体内维持数年。然而，胰岛供体的缺乏阻碍了这种疗法的有效实施。人造胰腺或胰岛提供了可移植胰岛的替代来源。因此，需要功能和特征类似于内源性胰岛的胰岛体外重建方法。

发明内容

在一方面，本公开内容提供了体外细胞簇，其包含至少一种非天然胰腺β细胞，其在暴露于葡萄糖负荷时表现出体外葡萄糖刺激的胰岛素分泌应答，其中所述细胞簇是未分选的细胞簇，并且其中所述细胞簇包含：(a)至少约35％的表达NKX6.1和C肽的细胞；(b)至少约70％的表达嗜铬粒蛋白A的细胞；(c)至多约2％的表达SOX2的细胞；或者(d)至多约10％的表达SOX9的细胞。

在另一方面，本公开内容提供了体外细胞簇，其包含至少一种不包含荧光蛋白的NKX6.1+和C肽+细胞，其中所述细胞簇在暴露于葡萄糖负荷时表现出体外葡萄糖刺激的胰岛素分泌应答，并且其中所述细胞簇包含：(a)至少约35％的表达NKX6.1和C肽的细胞；(b)至少约70％的表达嗜铬粒蛋白A的细胞；(c)至多约2％的表达SOX2的细胞；或者(d)至多约10％的表达SOX9的细胞。

在一些情况下，至少一种NKX6.1+和C肽+细胞是非天然胰腺β细胞，其在暴露于葡萄糖负荷时表现出体外葡萄糖刺激的胰岛素分泌应答。在一些情况下，细胞簇包含至少约35％的表达NKX6.1和C肽的细胞。在一些情况下，细胞簇包含至少约40％或至少约60％的表达NKX6.1和C肽的细胞。在一些情况下，细胞簇包含至少约70％的表达嗜铬粒蛋白A的细胞。在一些情况下，细胞簇包含至少约80％、至少约90％、至少约95％或100％的表达嗜铬粒蛋白A的细胞。在一些情况下，细胞簇包含至多约2％的表达SOX2的所述细胞簇中的细胞。在一些情况下，细胞簇包含至多约1.5％、至多约1％或至多约0.5％的表达SOX2的细胞。在一些情况下，细胞簇包含至多约10％的表达SOX9的细胞。在一些情况下，细胞簇包含至多约5％、至多约3％或至多约2％的表达SOX9的细胞。在一些情况下，细胞簇包含至多约2％、至多约1％、至多约0.5％或至多约0.1％的表达Ki67的细胞。

在一些情况下，体外细胞簇具有约150μm的直径。在一些情况下，体外细胞簇具有约50μm至约250μm的直径。在一些情况下，体外细胞簇具有约100μm至约200μm的直径。在一些情况下，与第二葡萄糖浓度相比，体外细胞簇响应于第一葡萄糖浓度表现出更高的胰岛素分泌，其中第一葡萄糖浓度高于第二葡萄糖浓度。在一些情况下，体外细胞簇进一步包含至少一种表达胰高血糖素的细胞或至少一种表达促生长素抑制素的细胞。在一些情况下，体外细胞簇响应于K+的第一浓度表现出胰岛素分泌。在一些情况下，当移植到受试者体内时，体外细胞簇在移植后28天内对受试者中的葡萄糖负荷表现出体内葡萄糖刺激的胰岛素分泌应答。在一些情况下，当移植到受试者体内时，第二体外细胞簇在移植后14天内对受试者中的葡萄糖负荷表现出体内葡萄糖刺激的胰岛素分泌应答。