[发明专利]利用阳离子分离细胞外囊泡的方法

权利要求书

1.一种分离细胞外囊泡的方法，所述方法包括：

(a)将阳离子添加到生物样品中；

(b)使所述阳离子与所述生物样品中含有的细胞外囊泡反应以形成细胞外囊泡-阳离子复合物；

(c)从样品中分离出所述细胞外囊泡-阳离子复合物；和

(d)从复合物中分离所述阳离子以纯化细胞外囊泡。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述生物样品是选自由哺乳动物细胞培养基、细菌细胞培养基、酵母培养基、组织提取物、癌组织、血清、血浆、唾液、泪液、汗液、尿液、粪便、脑脊液(CSF)、腹水、羊水、精液、乳汁、灰尘、淡水、海水、土壤和发酵食品组成的群组中的至少一种。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述阳离子是金属阳离子。

4.如权利要求1所述的方法，其中步骤(c)是通过使用选自由离心、超离心、过滤、超滤、重力沉淀、超声处理、密度梯度离心、尺寸排阻层析、离子交换层析、亲和层析、基于聚合物的沉淀和有机溶剂沉淀组成的群组中的至少一种来进行的。

5.如权利要求1所述的方法，其中步骤(d)包括选自以下群组中的至少一种：向所述分离出的细胞外囊泡-阳离子复合物中添加螯合剂、改变pH值和改变选自由咪唑、组氨酸、乙二胺四乙酸盐(EDTA)和盐组成的群组中的至少一种的浓度。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述螯合剂是选自由亚氨基二乙酸(IDA)、次氮基三乙酸(NTA)、三-(羧甲基)乙二胺(TED)、乙二胺、乙二胺四乙酸盐(EDTA)、亚烷基二胺三乙酸、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、乙二醇双(β-氨基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸(EGTA)、磷酸丝氨酸和1,4,7-三氮杂环壬烷(TACN)组成的群组中的至少一种。

7.如权利要求1所述的方法，其还包括在步骤(a)之前对所述样品进行预处理。

8.如权利要求1所述的方法，其还包括在步骤(d)之后对纯化的细胞外囊泡进行后处理。

9.如权利要求1所述的方法，其还包括在步骤(a)中添加聚合物或盐析离子。

10.如权利要求9所述的方法，其中在添加所述阳离子之前、同时或之后添加所述聚合物或盐析离子。

11.如权利要求9所述的方法，其中所述聚合物是聚乙二醇(PEG)或聚恶唑啉。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述聚恶唑啉是聚(2-甲基-2-恶唑啉)(PMOZ)、聚(2-乙基-2-恶唑啉)(PEOZ)或聚(2-丙基-2-恶唑啉)(PPOZ)。