[发明专利]数字化亲和连接试验

说明书

提供检测样品中的分析物的方法。还提供了进行本文所述方法的试剂盒。

本申请要求2017年9月27日提交的美国临时申请62/564,029的权益，该申请通过引用整体并入本文。

背景技术

来自受试者的样品中生物分子的定量可为多种临床应用提供有用的信息。一种检测和定量生物分子例如蛋白质的方法是通过酶联免疫吸附实验(ELISA)。然而，用该实验定量的检测和精确性有限，不足以满足许多需求。替代技术例如免疫-PCR能够提高检测灵敏度，但实际上由于用作检测剂的抗原的非特异性结合而受到高背景信号的问题限制。

发明内容

本文描述了用于检测样品中的靶标的方法，组合物和试剂盒。

在一个实施方式中，检测样品中的靶标的方法包括：使样品接触与固相载体连接的第一亲和剂，其中第一亲和剂与靶标(如存在)特异性结合，从而形成与第一亲和剂结合的靶标；基于固相载体的存在与否，将与第一亲和剂结合的靶标与样品中未结合的物质分离，从而产生分离的样品，其包含与第一亲和剂结合的靶标；使分离的样品与包含第一标记物的第二亲和剂以及包含第二标记物的第三亲和剂接触，其中第二和第三亲和剂特异性与靶标结合，从而形成靶标-标记的亲和剂复合物；将靶标-标记的亲和剂复合物与未复合的第二和第三亲和剂基于固相载体的存在与否分离，从而形成分离的靶标-标记的亲和剂复合物；将至少分离的靶标-标记的亲和剂复合物分到多个分区内；和通过检测至少同一个分区内第一和第二标记物的存在检测靶标在样品中的存在。

在一些实施方式中，检测样品中靶标的方法包括：使样品接触与固相载体连接的第一亲和剂、包含第一标记物的第二亲和剂以及包含第二标记物的第三亲和剂，其中第一、第二和第三亲和剂与靶标(如存在)特异性结合，从而形成靶标-标记的亲和剂复合物；基于固相载体的存在与否，将靶标-标记的亲和剂复合物与样品中未复合的组分分离，从而形成分离的靶标-标记的亲和剂复合物；将至少分离的靶标-标记的亲和剂复合物分到多个分区内；和通过检测至少同一个分区内第一和第二标记物的存在检测靶标在样品中的存在。

在某些实施方式中，检测样品中靶标的方法包括：使样品接触包含第一标记物的第二亲和剂以及包含第二标记物的第三亲和剂，其中第二和第三亲和剂与靶标(如存在)特异性结合，从而形成包含靶标、第二亲和剂和第三亲和剂的第一复合物；使第一复合物和与固相载体连接的第一亲和剂接触，其中第一亲和剂与靶标特异性结合，从而形成包含靶标、第一亲和剂、第二亲和剂和第三亲和剂的靶标-标记的亲和剂复合物；基于固相载体的存在与否，将靶标-标记的亲和剂复合物与未复合的组分分离，从而形成分离的靶标-标记的亲和剂复合物；将至少分离的靶标-标记的亲和剂复合物分到多个分区内；和通过检测至少同一个分区内第一和第二标记物的存在检测靶标在样品中的存在。

在一些实施方式中，检测样品中靶标的方法包括：将多个固相载体与包含靶标(如存在)的样品中的多个蛋白偶联，从而形成多个固相载体偶联物，其中靶标包含至少多个蛋白之一；基于多个固相载体存在与否，将多个固相载体偶联物与样品中的未偶联物质分离，从而形成分离的多个固相载体偶联物；使分离的多个固相载体偶联物与包含第一标记物的第一亲和剂以及包含第二标记物的第二亲和剂接触，其中第一和第二亲和剂与靶标特异性结合，从而形成靶标-标记的亲和载体复合物；基于固相载体的存在与否，将靶标-标记的亲和剂复合物与未复合的第一和第二亲和剂分离，从而产生分离的靶标-标记的亲和剂复合物；将至少分离的靶标-标记的亲和剂复合物分到多个分区内；和通过检测至少同一个分区内第一和第二标记物的存在检测靶标在样品中的存在。在一些实施方式中，偶联包括交联。

在一些实施方式中，分区步骤前从固相载体上切下第一亲和剂，从而从固相载体上释放靶标-标记的亲和剂复合物。在一些实施方式中，用序列特异性蛋白酶切下连接第一亲和剂与固相载体的氨基酸标签。在某些实施方式中，蛋白酶是TEV、因子Xa或凝血酶。在一些实施方式中，固相表面和第一亲和剂之间的光可切割的接头通过暴露于光而切割。

在一些实施方式中，分离的靶标-标记的亲和剂复合物分到多个分区前，交联靶标-标记的亲和剂复合物。