[发明专利]一种检测样品中微生物的方法

权利要求书

1.一种检测样品中微生物的方法，所述方法包括：

a)利用过滤器过滤样品以捕获样品中存在的任何微生物；

b)处理过滤器以从捕获的微生物中释放基因组物质或DNA；

c)扩增从捕获的微生物中释放的基因组物质或DNA；

d)鉴定基因组物质或DNA的特定区域，以确定任何捕获的微生物的存在、鉴定其物种或量化其大致数量；

其中步骤c)在过滤器上进行。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述微生物是细菌、真菌、古细菌、原生动物、藻类、微型动物或病毒。

3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述微生物选自革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、酵母、霉菌、单细胞的或硅藻类的藻类、DNA或RNA病毒中的一种或多种。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中步骤a)包括利用孔径为约0.01μm至约5μm的过滤器过滤所述样品。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述过滤器的孔径为约0.2μm。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中步骤b)包括使所述过滤器与声能、物理能或化学裂解，例如酶溶液和/或裂解缓冲液，接触。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中步骤b)包括下述顺序的步骤：破坏一种或多种微生物的细胞壁，并裂解所述捕获的微生物以在所述过滤器之上或其中释放它们的基因组物质或DNA。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中步骤c)包括在所述过滤器上或中进行基于PCR的扩增方法。

9.如权利要求8所述的方法，其中步骤c)包括在所述过滤器之上或其中进行多重置换扩增。

10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其进一步包括在步骤c)与步骤d)之间的进行步骤ci)，步骤ci)包括从所述过滤器中提取所述基因组物质或DNA。

11.如权利要求10所述的方法，其中步骤ci)包括使用正向力、负向力或离心力从所述过滤器中提取所述基因组物质或DNA。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中步骤d)包括使用聚合酶链反应(PCR)鉴定所述基因组物质或DNA的特定区域。

13.如权利要求12所述的方法，其中步骤d)包括定量聚合酶链反应(qPCR)。

14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述样品为管冲洗液、体液样品(例如血液或尿液样品)、拭子样品、咳嗽或空气样品、食品、肠外营养液、饮料、药物组合物或水。

15.一种诊断疾病或识别污染物的方法，所述方法包括按权利要求1至14中任一项所述的方法测试从患者、动物或制造过程中获得的样品。