[发明专利]用于防止细胞培养收获物中的二硫键还原的方法

说明书

本公开内容涉及用于防止重组宿主细胞中表达的多肽中二硫键还原的方法，其包括在发酵后将磷酸盐添加到重组宿主细胞的收获物溶液，其中多肽中的二硫键保持非还原的。

发明背景

生物制药业使用细胞培养产生多种治疗性蛋白质。多种细胞类型(包括原核生物和真核生物两者)可以用于表达重组治疗性蛋白质。生物制药业严重依赖于哺乳动物细胞，这是由于它们具有产生正确折叠且翻译后修饰的蛋白质的能力。制造治疗性蛋白质通常通过在生物反应器中培养细胞开始。监测各种营养物和工艺参数，以确保最佳的细胞生长和蛋白质生产。治疗性蛋白质通常是分泌的，因此收获蛋白质的第一步是除去细胞。在生物反应器中以及细胞除去期间，细胞可能裂解，释放可改变或降解重组蛋白的成分。例如，收获物中的酶和其他成分可以还原二硫键。由于完整的二硫键对于维持蛋白质的结构和功能是至关重要的，因此，防止二硫键还原的方法引起了极大的兴趣。

发明概述

实施方案提供了用于防止重组宿主细胞中表达的多肽中的二硫键还原的方法，该方法包括在发酵后将磷酸盐添加到重组宿主细胞的收获物溶液，其中所述多肽中的所述二硫键保持非还原的。

附图简述

本领域技术人员将理解，以下描述的附图是仅用于说明目的。附图无意以任何方式限制本教导或权利要求书的范围。

图1显示了使用项目1收获物(表达IgG2的CHOK1-SV细胞)和不同浓度的磷酸钠(pH7.0)进行的二硫化物还原测定法。

图2显示了使用项目2收获物(表达IgG1的CHO-M细胞)和不同浓度的磷酸钠(pH7.0)进行的二硫化物还原测定法。

图3(A)显示了添加到TFPI收获物以防止抗体还原的各种磷酸盐浓度。

图3(B)显示了实验3(A)的重复，显示了添加到TFPI收获物以防止抗体还原的各种磷酸盐浓度的相同结果。

发明详述

本公开提供了与防止多肽的二硫键还原相关的方法。

定义

只要适当，以单数形式使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。若以下列出的任何定义与任何其他文件(包括通过引用并入本文的任何文件)中该词的用法相冲突，则应当始终以下文列出的定义为准以解释本说明书及其相关权利要求书，除非明确意图相反的意义(例如，在最初使用术语的文件中)。除非另有说明，否则“或”的使用表示“和/或”。除非另有说明或者在使用“一个/种或多个/种”明显不合适的情况下，本文中使用“一个/种”表示“一个/种或多个/种”。“包含”或“包括”的使用是可互换的，并且不是限制性的。例如，术语“包括”应表示“包括但不限于”。

如本文所用，术语“TFPI”是指其由细胞天然表达并存在于血浆中的形式的TFPI的任何变体、同等型和/或物种同源物。