[发明专利]用于氨基酸消耗疗法的组合物和方法

权利要求书

1.一种纯化精氨酸酶的方法，其包括：

获得表达精氨酸酶的细胞；

破坏所述细胞以产生包括精氨酸酶的裂解物；

在CoCl₂存在下将所述裂解物的温度升高至沉淀温度持续足以使第一污染物从所述裂解物中沉淀出来并产生包括第一部分纯化的精氨酸酶的上清液的时间段；

使所述上清液与阴离子交换剂接触以产生第一结合级分和第一流过级分；

其中所述流过级分包括部分纯化的Co²⁺-精氨酸酶，其中用Co²⁺替换Mn²⁺。

2.根据权利要求1所述的方法，其包括以下另外的步骤：

使所述第一流过级分与阳离子交换剂接触以产生第二结合级分和第二流过级分；

将洗脱缓冲液施加至阳离子交换剂以产生洗脱级分，

其中所述洗脱级分包括纯化的Co²⁺-精氨酸酶，其中用Co²⁺替换Mn²⁺。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述细胞表达人精氨酸酶1。

4.根据权利要求1至3中一项所述的方法，其中所述细胞是细菌细胞。

5.根据权利要求1至4中一项所述的方法，其中所述沉淀温度大于50℃。

6.根据权利要求1至5中一项所述的方法，其中所述沉淀温度为约65℃。

7.根据权利要求1至6中一项所述的方法，其中以至少20mM的浓度提供CoCl₂。

8.根据权利要求1至7中一项所述的方法，其中所述时间段在5分钟和30分钟之间。

9.根据权利要求1至8中一项所述的方法，其中所述时间段为约15分钟。

10.根据权利要求1至9中一项所述的方法，其中所述阴离子交换剂是强阴离子交换剂。

11.根据权利要求1至10中一项所述的方法，其中所述阳离子交换剂是强阳离子交换剂。

12.根据权利要求2所述的方法，其中所述部分纯化的Co²⁺-精氨酸酶具有至少80％的纯度。

13.根据权利要求2所述的方法，其中所述纯化的人Co²⁺-精氨酸酶具有至少90％的纯度。

14.一种选择性衍生蛋白质的方法，其包括：

获得包括至少一种半胱氨酸的目标蛋白质；

在pH为6.5至7.0的缓冲液中，在2℃至15℃的温度下，使所述目标蛋白质与PEG-马来酰亚胺接触；和

在2℃至15℃下将所述目标蛋白质与所述PEG马来酰亚胺温育24小时至72小时，以产生PEG衍生的蛋白质，

其中所述PEG-马来酰亚胺以小于所述目标蛋白质的6倍摩尔过量的量存在。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述PEG-马来酰亚胺包括支链的PEG。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述PEG-马来酰亚胺包括直链PEG。

17.根据权利要求14至16中一项所述的方法，其中所述目标蛋白质是人精氨酸酶1或其突变。

18.根据权利要求17的方法，其中所述突变包括消除除了一个半胱氨酸以外的所有半胱氨酸。