[发明专利]由多能干细胞向肝细胞的分化诱导方法在审
| 申请号： | 201880066199.4 | 申请日： | 2018-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN111433353A | 公开（公告）日： | 2020-07-17 |
| 发明（设计）人： | 粂昭苑;白木伸明;山口宏之;井上智彰;中川俊人;清川顺平 | 申请（专利权）人： | 国立大学法人东京工业大学;关东化学株式会社;中外制药株式会社 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077;C12N5/0735;C12N5/10;C12Q1/06 |
| 代理公司： | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人： | 曾祯;段承恩 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多能 干细胞 肝细胞 分化 诱导 方法 | ||
1.由多能干细胞制作肝细胞或能够分化成肝细胞的细胞的方法，其特征在于，包括以下工序(1)～(4)，并且在工序(2)、(3)和(4)中的至少一个工序中，在高密度胶原蛋白凝胶膜上培养细胞，
工序(1)，用包含激活蛋白受体样激酶-4,7的激活剂的培养基培养多能干细胞，
工序(2)，用包含成骨因子和成纤维细胞生长因子的培养基培养由工序(1)得到的细胞，
工序(3)，用包含肝细胞生长因子受体的激活剂和抑癌蛋白M受体的激活剂的培养基培养由工序(2)得到的细胞，
工序(4)，培养由工序(3)得到的细胞，获得肝细胞或能够分化成肝细胞的细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在工序(2)、(3)和(4)的全部工序中，在高密度胶原蛋白凝胶膜上培养细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，激活蛋白受体样激酶-4,7的激活剂是激活蛋白A，成骨因子是BMP4，成纤维细胞生长因子是FGF10，肝细胞生长因子受体的激活剂是HGF，抑癌蛋白M受体的激活剂是抑癌蛋白M。
4.肝细胞或能够分化成肝细胞的细胞，其特征在于，是通过包括以下工序(1)～(4)，并且在工序(2)、(3)和(4)中的至少一个工序中，在高密度胶原蛋白凝胶膜上培养细胞的方法制作的，
工序(1)，用包含激活蛋白受体样激酶-4,7的激活剂的培养基培养多能干细胞，
工序(2)，用包含成骨因子和成纤维细胞生长因子的培养基培养由工序(1)得到的细胞，
工序(3)，用包含肝细胞生长因子受体的激活剂和抑癌蛋白M受体的激活剂的培养基培养由工序(2)得到的细胞，
工序(4)，培养由工序(3)得到的细胞，获得肝细胞或能够分化成肝细胞的细胞。
5.根据权利要求4所述的肝细胞或能够分化成肝细胞的细胞，其特征在于，在工序(2)、(3)和(4)的全部工序中，在高密度胶原蛋白凝胶膜上培养细胞。
6.根据权利要求4或5所述的肝细胞或能够分化成肝细胞的细胞，其特征在于，激活蛋白受体样激酶-4,7的激活剂是激活蛋白A，成骨因子是BMP4，成纤维细胞生长因子是FGF10，肝细胞生长因子受体的激活剂是HGF，抑癌蛋白M受体的激活剂是抑癌蛋白M。
7.由多能干细胞制作的肝细胞，其特征在于，CYP3A4的表达量是原代培养肝细胞的CYP3A4的表达量的2％以上。
8.被检验物质的特性的评价方法，其特征在于，包括以下工序：
工序(1)，在包含被检验物质的培养基中培养权利要求4～6中任一项所述的肝细胞，使肝细胞与被检验物质接触，
工序(2)，测定与特性相关的指标，评价被检验物质的特性。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，特性是安全性，与特性相关的指标是肝细胞的生存率。
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