[发明专利]重组大肠杆菌天冬酰胺酶的生产方法

权利要求书

1.一种用于生产重组II型天冬酰胺酶的方法，所述方法包括：

在培养基中培养假单胞菌目宿主细胞和在所述假单胞菌目宿主细胞的周质中从包含编码所述重组II型天冬酰胺酶的核酸的表达构建体表达所述重组II型天冬酰胺酶；其中所述重组II型天冬酰胺酶在所述周质中以约31％至约60％TCP可溶II型天冬酰胺酶的产率产生。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述可溶重组II型天冬酰胺酶在所述周质中以约10g/L至约38g/L的产率产生。

3.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使用活性试验测量所产生的一定量的所述重组II型天冬酰胺酶的活性。

4.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述重组II型天冬酰胺酶的所述核酸被优化用于在所述宿主细胞中表达。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组II型天冬酰胺酶是大肠杆菌L-天冬酰胺酶II型。

6.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述重组II型天冬酰胺酶的所述核酸包含与SEQ ID NO:1或3至少85％同源的序列。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组II型天冬酰胺酶具有与SEQ ID NO:2至少85％同源的氨基酸序列。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述假单胞菌目宿主细胞是荧光假单胞菌细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞缺乏一种或多种天然天冬酰胺酶的表达。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述一种或多种缺乏表达的天然天冬酰胺酶选自：I型天冬酰胺酶；II型天冬酰胺酶；及其组合。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞缺乏一种或多种蛋白酶的表达。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞过表达一种或多种折叠调节体。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞选自：

a)过表达LepB的宿主细胞；

b)过表达Tig的宿主细胞；

c)过表达DsbAC-Skp的宿主细胞；

d)缺乏Lon，HslUV，DegP1，DegP2，Prc，AprA，DegP2 S219A，Prc1，或AprA的宿主细胞；

e)缺乏AspG1的宿主细胞；

f)缺乏AspG2的宿主细胞；

g)不过表达折叠调节体并且不缺乏蛋白酶的宿主细胞；

h)不过表达折叠调节体，不缺乏蛋白酶；并且不缺乏AspG1的宿主细胞；

i)不过表达折叠调节体，不缺乏蛋白酶；并且不缺乏AspG2的宿主细胞；和

j)不过表达折叠调节体，不缺乏蛋白酶；并且不缺乏AspG1或AspG2的宿主细胞。