[发明专利]重组大肠杆菌天冬酰胺酶的生产方法

说明书

本文提供的是重组大肠杆菌天冬酰胺酶的生产方法。本文的方法允许天冬酰胺酶在假单胞菌目宿主细胞中的高表达水平的生产，并具有与可商购天冬酰胺酶制剂相当的活性。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年10月27日提交的美国临时申请号62/578,302的权益，其通过引用并入本文。

序列表

本申请包含序列表，其已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。所述ASCII副本创建于2018年10月16日，文件名为38194-751_601_SL.txt，大小为54,846字节。

背景技术

L-天冬酰胺酶催化L-天冬酰胺转化为L-天冬氨酸。来自细菌大肠杆菌的II型L-天冬酰胺酶是具有可切割的分泌信号序列的产生的四聚体高亲和力周质酶。也称为L-天冬酰胺酰胺水解酶，其是指示用于治疗具有急性淋巴细胞白血病(ALL)的患者的商业批准药物产品中的活性成分。例如，在美国批准用于ALL治疗，具有作为其活性成分的大肠杆菌L-天冬酰胺酶II型。(pegaspargase)含有共价缀合至单甲氧基聚乙二醇(mPEG)的L-天冬酰胺酶(L-天冬酰胺酰胺水解酶)。Oncaspar被批准在美国用于治疗一线ALL，以及ALL和针对天然大肠杆菌天冬酰胺酶的超敏。大肠杆菌L-天冬酰胺酶II型也用于治疗其他肿瘤病症。大肠杆菌天冬酰胺酶可以从大肠杆菌的培养物纯化以产生该药物物质，例如，是天然天冬酰胺酶缺陷型的遗传修饰大肠杆菌。在某些情况下，它是从具有异源分泌信号肽的基因融合体表达。

天冬酰胺酶的周质定位可以在不同表达系统中提供优势，包括包涵体的减少的产生，降低的蛋白水解，和真实蛋白N-端的产生。由于分泌途径辅因子的有限可用性和/或周质空间的空间限制，表达产率可以是更低的。如果细菌宿主细胞细胞质环境呈现很少的关于溶解性、降解和天冬酰胺酶单体的错误折叠的惩罚，重组天冬酰胺酶的细胞质表达可以产生更高的产率。

发明内容