[发明专利]载体

说明书

本发明提供了载体的试剂盒，其包含：(i)第一载体，其包含编码第一标志物组分的核酸序列；和(ii)第二载体，其包含编码第二标志物组分的核酸序列，其中，当用第一和第二载体两者转导细胞时，细胞表达第一和第二标志物组分并缔合形成由细胞分选试剂识别的异多聚体标志物，然而，当用单独的第一或第二载体转导细胞时，细胞分选试剂不识别单独的第一或第二标志物组分的表达。

本发明涉及载体的试剂盒。例如，用于转导细胞的逆转录病毒载体。

具体而言，本发明涉及一种试剂盒，其包括包含编码第一标志物组分的核酸的第一载体和包含编码第二标志物组分的核酸的第二载体。当用两种载体转导细胞时，两种标志物组分都在细胞中表达，并且它们缔合以形成可检测的异多聚体标志物。

本发明还涉及制造和检测用此类载体转导的细胞的方法，以及用于治疗/预防疾病的药物组合物和方法，所述方法包括施用此类细胞的组合物。

发明背景

数十年来，病毒载体已被用于转导T细胞以表达感兴趣的多肽。这些载体利用病毒中进化的专门分子机制以将其基因组有效地转移到它们感染的细胞内。但是，它们具有有限的转移能力，通常认为约为8至10千个碱基(kb)。该限制是由于包装效率与插入物大小成反比。

具有更高插入能力的基于T细胞的基因疗法的其他潜在的非病毒机制是已知的，但是这些通常因转导效率低和/或产生低T细胞数量的毒性作用而受到阻碍。

为了在保持高效率的同时将大的插入物大小转导至T细胞中，可以将病毒载体上编码的基因分成两个或更多个单独的载体。每个载体都用于制备病毒，然后将所有载体汇集以转导细胞。然而，该多重转导方法通常导致细胞被转导一些但不是所有所期望的载体。这导致包含不同载体整合体的非均匀细胞群体，其将不表达所有所期望的基因。

需要提供用大插入物大小转导和转染T细胞的改善的方法。

附图说明

图1–阐明异二聚体标志物的示意图。第一标志物组分是CD79a胞外域，并且第二标志物组分是CD79b胞外域与来自CD19的跨膜结构域和截短的胞内域之间的融合物。第一和第二标志物组分经由二硫键缔合。

图2–阐明另一种异二聚体标志物的示意图。第一标志物组分是Kappa恒定结构域，并且第二标志物组分是来自IgG1的CH1结构域与来自CD19的跨膜结构域和截短的胞内域之间的融合物。第一和第二标志物经由二硫键缔合。

图3–阐明异三聚体标志物的示意图。第一标志物组分是Kappa恒定结构域；第二标志物组分是CD79b胞外域与来自CD19的跨膜结构域和截短的胞内域之间的融合物；并且第三标志物是CD79a胞外域与来自IgG1的CH1结构域之间的融合物。第一、第二和第三标志物组分经由两个二硫键缔合以形成异三聚体标志物。

图4–由试剂盒的第一和第二载体编码的氨基酸序列。载体编码第一和第二标志物组分，所述第一和第二标志物组分缔合以形成如图2中所示的异二聚体标志物。

图5–由试剂盒的第一、第二和第三载体编码的氨基酸序列。载体编码第一、第二和第三标志物组分，所述第一、第二和第三标志物组分缔合以形成如图3中所示的异三聚体标志物。

图6A：阐明第一载体和第二载体的示意图，第一载体编码第一嵌合抗原受体(CAR)、2A肽切割位点和第一标志物(CAR1-2A-Mα)；并且第二载体编码第二CAR、2A肽切割位点和第二标志物(CAR2-2A-Mβ)。在每个载体上2A肽切割位点位于标志物和CAR之间。

B：阐明用图6A中所示的一种或两种载体转导细胞的效果的示意图。当用单独的第一或第二载体转导细胞时，转基因得以表达(CAR1或CAR2)，但在细胞表面没有可检测的标志物表达。当用第一和第二载体两者转导细胞时，两种CAR都得以表达，并且第一和第二标志物组分的缔合形成稳定的异二聚体标志物，其也在细胞表面表达。