[发明专利]修饰的胱天蛋白酶-9多肽及其使用方法

说明书

本文提供了修饰的胱天蛋白酶‑9多肽和含有修饰的胱天蛋白酶‑9多肽的嵌合胱天蛋白酶‑9蛋白。本公开进一步提供了编码这些蛋白质的多核苷酸、包含这些多核苷酸和蛋白质的工程化宿主细胞、包括共表达嵌合抗原受体的宿主细胞、以及制备和使用它们的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年11月1日提交的美国临时申请序列号62/580,276和2017年11月30日提交的美国临时申请序列号62/592,447的优先权，其每一个通过引用全部并入本文用于所有目的。

参考序列表

本申请正在通过EFS-Web电子提交，并包括以.txt格式电子提交的序列表。.txt文件包含序列表，名称为ALGN01302WO_Seqtxt.txt，创建于2018年10月31日，大小为24,781字节。该.txt文件中包含的序列表是说明书的一部分，并且在此通过引用全文并入。

技术领域

本公开涉及修饰的胱天蛋白酶-9多肽及其用途。与野生型人胱天蛋白酶-9蛋白相比，本文提供的修饰的胱天蛋白酶-9多肽含有至少1个氨基酸突变。

背景技术

胱天蛋白酶9是一种蛋白质，其参与哺乳动物细胞凋亡的启动(程序性细胞死亡)。包含胱天蛋白酶-9部分的嵌合蛋白可以用作系统的一部分，该系统允许在被工程化成表达该嵌合蛋白的宿主细胞中诱导凋亡。例如，可以制备包含与配体介导的二聚化结构域连接的胱天蛋白酶-9多肽的嵌合蛋白。含有介导二聚化结构域二聚的配体的含有该嵌合蛋白的宿主细胞暴露导致宿主细胞中胱天蛋白酶-9信号传导的活化，导致凋亡和细胞死亡。该系统例如可以用作细胞疗法的安全机制。在该系统中，首先对要给予受试者的宿主细胞进行工程化以表达含有胱天蛋白酶-9的嵌合蛋白。然后，在将工程化宿主细胞引入受试者后，如果需要的话，可以向受试者施用诱导二聚化的配体(例如在宿主细胞对受试者造成严重的不期望影响的情况下)。配体对受试者的施用导致包含嵌合蛋白的宿主细胞中胱天蛋白酶-9信号传导的活化以及此类宿主细胞的随后死亡，从而减少了宿主细胞在受试者中的不期望作用(参见，例如Gargett T和Brown，Front Pharmacol.2014；5：235)。

在某些情况下，含有胱天蛋白酶-9多肽和二聚化结构域的嵌合蛋白在表达该嵌合蛋白的宿主细胞中可具有不希望的高水平的基础胱天蛋白酶-9活性(即该嵌合蛋白可能在不存在介导嵌合蛋白二聚化的配体的情况下具有活性)。在不存在配体的情况下，基础胱天蛋白酶-9活性可导致例如不希望的细胞死亡水平。

降低嵌合胱天蛋白酶-9蛋白中的基础胱天蛋白酶-9活性的一种可能的方法是在嵌合胱天蛋白酶-9蛋白的胱天蛋白酶-9部分中引入一种或多种修饰。例如，可将一种或多种突变引入嵌合胱天蛋白酶-9蛋白中的胱天蛋白酶-9多肽的氨基酸序列中。理想地，此类修饰将降低嵌合蛋白中的基础胱天蛋白酶-9活性，但不会降低或只会略微降低嵌合蛋白的胱天蛋白酶-9活性，以响应二聚化诱导的配体。降低胱天蛋白酶-9多肽的基础活性的一些突变的实例在例如美国专利号9,434,935中描述。

然而，仍然需要替代的和改良的修饰的胱天蛋白酶-9多肽。替代的和改良的修饰的胱天蛋白酶-9多肽可以提供例如替代的和改良的细胞疗法组合物和方法。

发明内容

本文提供了修饰的胱天蛋白酶-9多肽及其用途。与相应的未修饰的胱天蛋白酶-9多肽相比，修饰的胱天蛋白酶-9多肽可以具有一种或多种有用的特性。

例如，在本文提供的一些实施方案中，提供了修饰的胱天蛋白酶-9多肽，其中与相应的未修饰的胱天蛋白酶-9多肽相比，修饰的胱天蛋白酶-9多肽具有降低的基础活性，但是其中修饰的胱天蛋白酶-9多肽也可以仍然有效地介导胱天蛋白酶-9信号传导。