[发明专利]促转导素-D－改良的基因转移增强剂

说明书

本发明涉及具有序列Z¹‑Gln‑Ala‑Lys‑Ile‑Lys‑Gln‑Ile‑Ile‑Asn‑Met‑Trp‑Gln‑Z²的多肽。该多肽用于逆转录病毒转染/转导。

本申请涉及改进的基因转移增强剂(即促转导素D(PTD-D)，其是对转导增强剂PTD-A和PTD-B的改进)，并且涉及其多肽，并且涉及其N末端保护的多肽，并且涉及包含所述多肽的药物，并且涉及所述多肽在基因治疗中的应用，并且涉及用于增强基因工程病毒构建体对细胞的感染的方法以及所述多肽用于转染或转导扩增的用途。

自克隆第一个人类基因并重组生产以来，用于改变特定细胞功能的遗传物质的引入已成为生物医学基础和应用研究中必不可少的工具。基因导入方法不断进步，促使基因转移的优化。

对转导增强剂的开发研究使得促转导素-A被发现，这是一种来自HIV病毒包膜蛋白的肽。令人惊讶的是，它适合于以前所未有的程度提高基因材料进入核内的慢病毒转导(Yolamanova等人，自然·纳米技术)。因此，可以证明，例如，与金标准“重组人纤维蛋白片段(retroectin)”相比，以不同浓度(1-100μg/ml)的促转导素-A(同义词：EF-C)预温育的HIV对报告细胞的感染率增加了十的几次方倍。作为作用机理，假定EF-C形成能够结合和浓缩病毒并因此放大病毒进入细胞的纤维结构。除感染病毒颗粒外，EF-C还可以在基因治疗中广泛应用的多种人类细胞类型(T细胞、胶质细胞、成纤维细胞、造血干细胞)中高效增强慢病毒和逆转录病毒颗粒的转导(Jan Münch等人，自然·纳米技术，第8卷，第2期，第130-136页)。EP 2452947A1也涉及促转导素A。

半胱氨酸属于极性中性氨基酸。此外，由于其独特的功能性硫醇基团，因此半胱氨酸是一种从未被考虑过修饰或甚至被另一种氨基酸，尤其是来自另一组氨基酸的取代的氨基酸。像Cys一样，Tyr、Asp、Ser、Gly、Gln、Thr是一部分极性但中性的氨基酸。但是，本领域技术人员会回避用其他组的氨基酸取代，因为这种取代对通过交换修饰的肽的二级结构的影响是难以预见的。因此，本领域技术人员不会考虑用非极性疏水性氨基酸组中的氨基酸取代促转导素的Cys。

然而，现在令人惊讶地发现，促转导素中的氨基酸Cys可以被丙氨酸取代，而不会导致修饰的多肽作为转导增强剂的有效性发生显著变化。

根据本发明，提供了一种修饰的促转导素，其一方面具有与PTD-A作为转导增强剂相当的功效，还具有更高的储存稳定性，并且确保了在其作为转导增强剂的应用中的操作更简单，这是GMP生产中的巨大优势。

本发明的多肽与如下序列具有至少80％或90％的序列同一性，尤其是95％的序列同一性

Z¹-Gln-Ala-Lys-Ile-Lys-Gln-Ile-Ile-Asn-Met-Trp-Gln-Z²。

Z¹彼此独立地是多肽的N末端，或彼此独立地是氨基酸Leu或Ser，或以下肽：

Ser-Asn、Ser-Asn-Asn、Ser-Asn-Asn-Ile、Ser-Asn-Asn-Ile-Thr、Thr-Leu、Ile-Thr-Leu、Asn-Ile-Thr-Leu、Asn-Asn-Ile-Thr-Leu、或Ser-Asn-Asn-Ile-Thr-Leu，

Z²彼此独立地为多肽的C末端，或彼此独立地为氨基酸Gly或Glu或以下肽：