[发明专利]稳定且副作用少的基因组编辑用复合物和编码该复合物的核酸

权利要求书

1.复合物，其为核酸序列识别模块与蛋白降解标签结合而得的复合物，所述核酸序列识别模块与双链DNA中的靶核苷酸序列特异性地结合，所述蛋白降解标签由(i)在C末端包含疏水性氨基酸的3个残基的肽或(ii)在C末端包含该氨基酸残基的至少一部分被丝氨酸取代的氨基酸的3个残基的肽构成。

2.权利要求1所述的复合物，上述复合物为进一步结合有核酸修饰酶的复合物，其中，将靶向位点的1个以上的核苷酸转换成其他的1个以上的核苷酸或使其缺失、或者在该靶向位点插入1个以上的核苷酸。

3.权利要求1或2所述的复合物，其中，上述氨基酸的3个残基为亮氨酸-缬氨酸-丙氨酸、亮氨酸-丙氨酸-丙氨酸、丙氨酸-丙氨酸-缬氨酸或丙氨酸-丝氨酸-缬氨酸。

4.权利要求1～3中任一项所述的复合物，其中，上述核酸序列识别模块为Cas的2个DNA切割能力中的仅一方、或两方的DNA切割能力失活的CRISPR-Cas系统。

5.权利要求1～3中任一项所述的复合物，其中，上述复合物为CRISPR-Cas系统与蛋白降解标签结合而得的复合物。

6.权利要求2～4中任一项所述的复合物，其中，上述核酸修饰酶为核酸碱基转换酶或DNA糖基化酶。

7.权利要求6所述的复合物，其中，上述核酸碱基转换酶为脱氨酶。

8.权利要求6或7所述的复合物，该复合物进一步结合有碱基切除修复抑制剂。

9.核酸，该核酸编码权利要求1～8中任一项所述的复合物。

10.修饰细菌的双链DNA的靶向位点、或在该位点附近调控双链DNA所编码的基因的表达的方法，该方法包括以下步骤：使核酸序列识别模块与蛋白降解标签结合而得的复合物、与该双链DNA接触，所述核酸序列识别模块与所选择的双链DNA中的靶核苷酸序列特异性地结合，所述蛋白降解标签由(i)在C末端包含疏水性氨基酸的3个残基的肽或(ii)在C末端包含该氨基酸残基的至少一部分被丝氨酸取代的氨基酸的3个残基的肽构成。

11.权利要求10所述的方法，其中，上述复合物为进一步结合有核酸修饰酶的复合物，该方法包括以下步骤：将该靶向位点的1个以上的核苷酸转换成其他的1个以上的核苷酸或使其缺失、或者在该靶向位点插入1个以上的核苷酸。

12.权利要求10或11所述的方法，其中，上述氨基酸的3个残基为亮氨酸-缬氨酸-丙氨酸、亮氨酸-丙氨酸-丙氨酸、丙氨酸-丙氨酸-缬氨酸或丙氨酸-丝氨酸-缬氨酸。

13.权利要求10～12中任一项所述的方法，其中，上述核酸序列识别模块为Cas的2个DNA切割能力中的仅一方、或两方的DNA切割能力失活的CRISPR-Cas系统。

14.权利要求10～12中任一项所述的方法，其中，上述复合物为CRISPR-Cas系统与蛋白降解标签结合而得的复合物。

15.权利要求10～14中任一项所述的方法，其特征在于：使用与不同的靶核苷酸序列分别特异性地结合的、两种以上的核酸序列识别模块。

16.权利要求15所述的方法，其中，上述不同的靶核苷酸序列存在于不同的基因内。

17.权利要求10～13、15和16中任一项所述的方法，其中，上述核酸修饰酶为核酸碱基转换酶或DNA糖基化酶。

18.权利要求17所述的方法，其中，上述核酸碱基转换酶为脱氨酶。