[发明专利]使用脂质纳米粒子的体外MRNA递送方法

权利要求书

1.一种将mRNA递送至造血干细胞和/或祖细胞(HSPC)或HSPC群体的方法，所述方法包括：

a.将血清因子与包含所述mRNA、胺脂质、辅助脂质、中性脂质和PEG脂质的LNP组合物一起预孵育；

b.在体外使所述HSPC或所述HSPC群体与所述预孵育的LNP组合物接触；以及

c.在体外培养所述HSPC或所述HSPC群体；

从而将所述mRNA递送至所述HSPC或所述HSPC群体。

2.一种将mRNA递送至HSPC的方法，所述方法包括：

a.将血清因子与包含所述mRNA和胺脂质的LNP组合物一起预孵育；

b.在体外使所述细胞与所述预孵育的LNP组合物接触；以及

c.在体外培养所述HSPC；

从而将所述mRNA递送至所述HSPC。

3.一种将mRNA递送至干细胞或干细胞群体的方法，所述方法包括：

a.将血清因子与包含所述mRNA的LNP组合物一起预孵育；

b.在体外使所述干细胞群体与所述预孵育的LNP组合物接触；以及

c.在体外培养所述干细胞群体；

从而将所述mRNA递送至所述干细胞群体。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述mRNA编码Cas核酸酶。

5.一种将Cas核酸酶mRNA和gRNA引入HSPC的方法，所述方法包括：

a.将血清因子与包含所述Cas核酸酶mRNA、gRNA、胺脂质、辅助脂质、中性脂质和PEG脂质的LNP组合物一起预孵育；

b.在体外使所述HSPC与所述预孵育的LNP组合物接触；以及

c.培养所述HSPC；

从而将所述Cas核酸酶mRNA和所述gRNA引入所述HSPC。

6.一种在体外产生基因工程化的HSPC的方法，所述方法包括：

a.将血清因子与包含Cas核酸酶mRNA、gRNA、胺脂质、辅助脂质、中性脂质和PEG脂质的LNP组合物一起预孵育；

b.在体外使所述HSPC与所述预孵育的LNP组合物接触；以及

c.在体外培养所述HSPC；

从而产生基因工程化的HSPC。

7.一种将Cas核酸酶mRNA和gRNA引入干细胞的方法，所述方法包括：

a.将血清因子与包含所述Cas核酸酶mRNA、gRNA和胺脂质的LNP组合物一起预孵育；

b.在体外使所述干细胞与所述预孵育的LNP组合物接触；以及

c.培养所述干细胞；

从而将所述Cas核酸酶mRNA和所述gRNA引入所述干细胞。

8.一种在体外产生基因工程化的干细胞诸如HSPC的方法，所述方法包括：

a.将血清因子与包含Cas核酸酶mRNA、gRNA和可生物降解脂质的LNP组合物一起预孵育；

b.在体外使所述细胞与所述预孵育的LNP组合物接触；以及

c.在体外培养所述细胞；

从而产生基因工程化的干细胞，诸如HSPC。

9.如权利要求4所述的方法，其中所述LNP组合物还包含gRNA。

10.如权利要求4-9中任一项所述的方法，其中所述Cas核酸酶为2类Cas核酸酶。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述2类Cas核酸酶为Cas9核酸酶。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述Cas9核酸酶为酿脓链球菌Cas9。

13.如权利要求10所述的方法，其中所述2类Cas核酸酶为Cpf1核酸酶。