[发明专利]经修饰的CAR-T

说明书

本发明涉及表达提供嵌合抗原受体(CAR)的表达的构建体的γδ(gamma delta)T细胞和/或自然杀伤(NK)细胞，所述嵌合抗原受体(CAR)并入了FCY受体的信号传导结构域。合适地，本发明还涉及提供这样的CAR的构建体以及用于将这样的CAR引入细胞中并且在包含γδ(gamma delta)T细胞受体和/或自然杀伤(NK)细胞受体的细胞中表达这样的CAR的方法。

发明领域

本发明涉及表达提供嵌合抗原受体(CAR)的表达的构建体的γδ(gamma delta)T细胞和/或自然杀伤(NK)细胞，所述嵌合抗原受体(CAR)并入了Fcγ受体的信号传导结构域。合适地，本发明还涉及提供这样的CAR的构建体以及用于将这样的CAR引入细胞中并且在包含γδ(gamma delta)T细胞受体和/或自然杀伤(NK)细胞受体的细胞中表达这样的CAR的方法。

背景

免疫球蛋白(Ig)的细胞受体(Fc受体)在40年前被鉴定出，并且在免疫应答的启动和消退中发挥核心作用。这些受体设定B细胞活化的阈值，调节树突细胞的成熟，并且将抗体应答的特异性偶联至固有效应物功能，诸如吞噬作用和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。在迄今研究过的所有哺乳动物物种中，已经鉴定出四种不同类别的识别IgG的Fc受体(FcR)，FcγRI(CD64)、FcRγRII(CD32)、FcRγIII(CD16)和FcRγIV。基于它们的功能，可以将它们细分为两类，活化性受体和抑制性受体，它们分别通过基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)或抑制基序(ITIM)传递信号。FcγRIIB属于包括调节免疫应答的CTLA-4和PD-1的免疫抑制性受体家族。活化性FcγR包括FcγRI、FcγRIIA、FcγRIII和FcγRIV。活化性Fcγ受体的接合触发许多生物功能，诸如B细胞的增殖、巨噬细胞的吞噬作用、细胞溶解、脱粒和启动炎性应答的细胞因子编码基因的转录活化。大多数活化型FcR与包含ITAM的Fc受体共有γ链(FcRγ)缔合(FcRγ链(FcR共有γ链)与细胞因子受体使用的共有γ链(CD132)不同)。另一方面，活化性受体CD32a和CD32c具有包含细胞内ITAM的结构域。配体结合后Fc受体的聚集导致ITAM磷酸化和细胞活化。

免疫细胞诸如γδT细胞和NK细胞表达Fcγ受体，所述Fcγ受体介导它们的至少一部分功能。这些细胞是固有免疫系统的一部分，并且对于针对癌症和感染的免疫是不可或缺的。它们利用许多受体来识别并且杀死被感染的细胞和癌性细胞。它们介导它们的细胞毒性活性的方式之一是通过Fcγ受体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。这是一种免疫机制，免疫系统的效应细胞藉此主动裂解靶细胞，所述靶细胞上的膜表面抗原已经被特异性抗体结合。γδT细胞和NK细胞表达介导ADCC的Fcy受体CD32和CD16。这两种细胞类型都已经作为针对多种类型的癌症(例如黑素瘤、肾细胞癌等)的细胞疗法进行试验，显示出安全性和治疗潜力。体外研究已经证明，这些细胞的效应物功能可以被单克隆抗体增强，这可能是由于由表达的FcR启动的活化信号。这导致提出这些细胞疗法应与单克隆抗体疗法例如靶向HER2受体的曲妥珠单抗组合。通过这种方式，这些细胞的活性将集中于被抗体结合的细胞(Tokuyama等人,International journal of Cancer,2011,Vγ9Vδ2T cell cytotoxicityagainst tumor cells is enhanced by monoclonal antibody drugs—Rituximab andtrastuzumab和Gertner-Dardenne等人,Blood,2009,Bromohydrin pyrophosphateenhances antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity induced by therapeuticantibodies)。

嵌合抗原受体(CAR)