[发明专利]通过实时谷胱甘肽测定来测量治疗细胞质量的方法

权利要求书

1.一种非诊断非治疗的测量细胞质量的方法，包括：

分离所需细胞；

测量分离细胞中的谷胱甘肽水平；和

根据谷胱甘肽水平确定细胞质量，

其中，根据谷胱甘肽水平对细胞质量的确定是根据选自下组一种或多种评估参数来进行的：

i)细胞的谷胱甘肽的均值或中位水平；

ii)细胞的谷胱甘肽异质性；

iii)细胞的谷胱甘肽再生能力；和

iv)抗氧化应力能力，

其中，谷胱甘肽的均值或中位水平计算为细胞FreSH-示踪剂比率或F510的平均值或中位数，

谷胱甘肽异质性计算为细胞FreSH-示踪剂比率或F510的变异系数或稳健变异系数，

谷胱甘肽再生能力是通过用氧化剂处理活细胞后实时检测FR或F510所获得的值，该值是通过第一氧化剂处理组的第一曲线下面积减去第二氧化剂处理组的第二曲线下面积所得的值，除以未处理对照组的第三曲线下面积减去第二氧化剂处理组的第二曲线下面积所得的值，并乘以100得到的，和

抗氧化应力能力是随谷胱甘肽表达而变化的细胞计数值，其通过将活细胞用第一氧化剂处理后定量的谷胱甘肽水平，与没有用氧化剂处理过的对照细胞或尚未用氧化剂处理的对照细胞中定量的谷胱甘肽水平进行比较而获得；且

其中谷胱甘肽水平的测量是通过添加化学试剂B-4,B-5,B-6,B-7或B-8进行的：[式B-4]

[式B-5]

[式B-6]

[式B-7]

[式B-8]

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，FreSH-示踪剂比率为在430-550nm的荧光强度与在550-680nm的荧光强度之间的比率。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当细胞的谷胱甘肽的均值或中位水平在用氧化应激处理之前或之后增加时，细胞的质量被确定为良好。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当细胞的谷胱甘肽异质性在氧化应激处理之前或之后降低时，细胞的质量被确定为良好。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当细胞的谷胱甘肽再生能力增加时，细胞的质量被确定为良好。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，就抗氧化应力能力而言，与未用或尚未用氧化剂处理的对照细胞的谷胱甘肽水平相比，当有少量细胞用氧化剂处理后，具有量化的较低谷胱甘肽水平时，或与未用或尚未用氧化剂处理的对照细胞的谷胱甘肽水平相比，有大量细胞用氧化剂处理后，具有量化的较高或相同谷胱甘肽水平时，细胞质量被确定为良好。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一氧化剂包括选自下组的一种或多种：H₂O₂、二酰胺、氧化的GSH、5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)、马来酰亚胺、N-乙基马来酰亚胺、4-马来酰亚胺基丁酸、3-马来酰亚胺基丙酸、碘乙酰胺、双-氯乙基硝基唑脲、PX-12、抗霉素A、鱼藤酮、寡霉素、羰基氰化物间氯苯腙、佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯、1S,3R-RAS选择性致死3、DPI19、DPI18、DPI17、DPI13、DPI12、DPI10、DPI7、六甲蜜胺、爱拉斯汀、柳氮磺胺吡啶、索拉非尼、谷氨酸盐、哌嗪爱拉斯汀、咪唑酮爱拉斯汀、铁诱导的细胞死亡诱导剂56、半胱天冬酶非依赖性致死性56、内过氧化物、丁硫氨酸-(S,R)-亚磺酰亚胺、马来酸二乙酯、DPI2、顺铂、半胱氨酸酶、柠檬酸铁铵、葫芦巴碱和四氯化碳。

8.如权利要求1所述的方法，特征在于，所述第二氧化剂包括：马来酰亚胺、4-马来酰亚胺基丁酸、3-马来酰亚胺基丙酸、乙基马来酰亚胺、N-乙基马来酰亚胺、碘乙酰胺、5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)或碘乙酰胺基丙酸。