[发明专利]通过实时谷胱甘肽测定来测量治疗细胞质量的方法

说明书

本发明提供了一种通过实时谷胱甘肽监测来测量治疗细胞质量的方法。

[技术领域]

本发明涉及一种通过实时谷胱甘肽监测来测量细胞质量的方法。

[背景技术]

尽管人体通过抗氧化剂系统的作用适当地消除了活性氧(ROS)以维持体内平衡，但是当ROS的产生和抗氧化剂作用之间的平衡被打破时，氧化应激会增加，并且氧化应激作为代谢综合症(如糖尿病、肥胖或心血管疾病以及衰老)、与年龄有关的变性疾病(如变性关节炎、白内障或阿尔茨海默氏病)、各种类型的癌症和纤维化疾病的发病的重要常见病因，最近引起了人们的关注。作为衰老的主要机制之一，ROS不稳定且对氧化生物分子具有高反应活性，因此会引起生化和生理损伤。因此，除人体的氧化度外，抗氧化度或抗氧化能力可能是计算生物年龄的关键生物标记。

ROS是调节细胞代谢、增殖和存活的重要信号分子。ROS的增加会诱导信号蛋白上半胱氨酸残基的巯基氧化，导致调节细胞功能的蛋白活性发生变化。尤其是，ROS介导的氧化在调节干细胞(SCs)的各种信号蛋白中起着重要作用，这些干细胞会影响自我更新能力、多能性、生存能力和基因组稳定性，包括OCT4、NRF2、FoxO、APE1/Ref-1、ATM、HIF-1、p38和p53(Wang等，2013)。

同时，有多种方法用于评估干细胞和细胞培养物的质量、一致性和功效。干细胞通过自我更新能力和特定标记的表达来定义。应该对所需细胞群的身份进行定义。当前的hESC细胞系的特征是使用一系列标准化指标(例如，体外(形成胚胎体)和体内分化(形成畸胎瘤样异种移植物))、以及表面抗原、特定酶活性(例如碱性磷酸酶)的表达、基因表达、表观遗传标记、基因组稳定性、细胞学和形态的评估缺乏可测量的微生物感染潜能(日本专利5185443)。然而，尽管用于评估这些干细胞特性的程序需要熟练的技术人员，但它们提供的信息相对较少，既耗时又昂贵。此外，这些程序没有提供有关所生产细胞的安全性和/或客观适宜性的关键信息。就干细胞而言，除了在支持未分化细胞增殖的条件下扩大细胞群外，在诱导阶段提供有关干细胞质量和一致性的信息，在细胞培养的连续传代中测量准确的细胞质量并改善其质量是必要的。

[公开]

[技术问题]

本发明旨在提供一种通过实时谷胱甘肽监测来测量治疗细胞质量的方法。另外，本发明涉及表征细胞和/或改善体外细胞培养系统的质量和安全性。

[技术方案]

在下文中，在本发明中描述的各种示例性实施例参考附图进行描述。在下面的描述中，为了完全理解本发明，描述了各种具体细节，例如具体形式、组成和方法。但是，可以在没有一个或多个这些具体细节或其他已知方法和形式的情况下实现特定实施例。在另一实施方案中，没有特别详细地描述已知的工艺和制造技术，以免不必要地使本发明晦涩难懂。整个说明书中对“一种实施方案”或“实施方案”的引用是指结合该实施例描述的特定特征、形式、组成或特性包括在本发明的一个或多个实施方案中。因此，在整个说明书中的不同位置表示的“一个实施方案”或“实施方案”的不一定代表本发明的相同实施方案。另外，在一个或多个实施方案中，可以以任何合适的方式组合特定特征、形式、组成或特性。除非另有定义，否则在说明书中，本文所用的所有科学和技术术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。

在本发明的一个示例性实施方案中，术语“荧光实时SH基团(FreSH)-示踪剂”或“FreSH”是指包含下式A表示的化合物或其盐的化合物，并用作用于检测不限于细胞器硫醇的荧光物质。因此，FreSH-示踪剂既包括对细胞器特异性的化合物又包括不限于此的化合物。

[式A]