[发明专利]用于体液鉴定的方法

说明书

犯罪现场调查人员需要鉴定生物学组织或体液类型。这样的分析通常使用常规化学、血清学和酶学测试进行以鉴定体液或组织，然而，这些测试可能不可靠，并且常常不能满足法医学分析所需的特异性和灵敏度。本发明提供了通过检测特定RNA序列来准确鉴定循环血液、唾液、精子、精液、月经液和阴道物质的方法。特别地，本发明提供了用于确定生物学样品的类型的方法，其包括以下步骤：从所述样品中检测与HBD、SLC4A1、GYPA、FDCSP、HTN3、STATH、PRM1、TNP1、PRM2、KLK2、MSMB、TGM4、MMP10、STC1、MMP3、MMP11、CYP2B7P、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)(L.gass)和卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)(L.crisp)中的任一种或更多种相关的RNA，以及确定所述样品是否是循环血液、唾液、精子、精液、月经液或阴道物质。

相关申请

本申请要求2017年10月2日提交的新西兰临时申请号735997和2018年2月9日提交的新西兰临时申请号739809的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

该技术领域是RNA序列的检测，以及这些序列用于样品(特别是含有降解的RNA的样品)的鉴定和分型的用途。

背景技术

在许多情况下，犯罪现场调查人员会遇到感兴趣的细胞或体液，但需要确定其是什么组织或流体。该信息对于建立案件的活动场景可以是重要的。例如，经血的存在可表明性活动，而循环血液可能是外伤的结果。通常使用常规化学、血清学和酶学测试进行这样的分析以鉴定体液或组织，然而，这些测试可能不可靠，并且通常不能满足法医学分析所需的特异性和灵敏度。

基于细胞和组织中独特基因表达模式的信使RNA(mRNA)分析已成为克服这些局限性的一种方法[1-4]。用于组合的短串联重复序列(short tandem repeat，STR)和体液分析的DNA/RNA共提取现已成为世界各地案件研究实验室使用的有效且全面的工具。然而，自2003年引入差异表达的mRNA用于法医学唾液分析[2]以来，只有一小部分“核心”标志物被用于多重设计。这些包括唾液和口腔黏膜的组蛋白3(HTN3)和唾液蛋白(statherin)(STATH)[1，3，5-7]，精子的鱼精蛋白1和2(PRM1/2)[1，3，5-7]，精液的转谷氨酰胺酶4(TGM4)或精胶蛋白1(SEMG1)[1，3]，月经液的基质金属肽酶(MMP)7、10或11[1，3，5-7]，以及阴道物质的人β-防御素1(HBD1)、黏蛋白4(MUC4)或卷曲乳杆菌(Lactobacilli crispatus)(L.crisp)和格氏乳杆菌(Lactobacilli gasseri)(L.gass)[1，3，5-7]。在使用循环血液标志物时观察到更大的可变性。通常靶向的转录物包括血影蛋白β(SPTB)、羟甲基胆碱合酶(PBGD)、5′-氨基乙酰丙酸酯合酶2(ALAS2)、血型糖蛋白A(GYPA)、黏附分子、与CXADR抗原1(AMICA1)的相互作用、CD93分子和血红蛋白β(HBB)[1，3，5-7]。已经提出了其他mRNA标志物，但是与上述标志物相比，其由于特异性和灵敏度较低而较少使用[8-13]。细胞色素P450家族2亚家族B成员7假基因(CYP2B7P)是一个例外，它是用于检测阴道物质的有用标志物[14]。

准确检测和量化RNA丰度的能力是分子生物学的基本能力。广泛的多种RNA检测方法是目前可用的，从非扩增方法(原位杂交、微阵列和NanoString nCounter)到基于扩增(PCR)的方法(逆转录酶PCR(RT-PCR)和定量逆转录酶PCR(qRT-PCR))。除了RNAseq(下一代测序，也被称为第二代测序或大规模平行测序)外，所有RNA检测技术的关键先决条件是靶RNA序列的现有知识。这种靶向通过寡核苷酸序列在非扩增方法(探针)和基于扩增的方法(引物)两者中得到辅助。