[发明专利]DNA聚合酶

权利要求书

1.一种DNA聚合酶，其包括SEQ ID NO.1的序列或与所述SEQ ID NO.1的序列具有至少70％同一性的序列，但是其中所述SEQ ID NO.1的第18位处的天冬氨酸残基或其它序列中的等同的天冬氨酸残基已被非负电荷的氨基酸残基置换。

2.根据权利要求1所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包括与所述SEQ ID NO.1具有至少88％同一性的氨基酸序列，但是其中所述SEQ ID NO.1的第18位处的天冬氨酸残基或其它序列中的等同的天冬氨酸残基已被非负电荷的氨基酸残基置换。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含SEQ IDNO.6、7、8、9或10的氨基酸序列，但是其中每个序列的第18位处的天冬氨酸残基已被非负电荷的氨基酸残基置换。

4.一种DNA聚合酶，其包含SEQ ID NO.2的氨基酸序列或与所述SEQ ID NO.2具有至少60％同一性的氨基酸序列，但是其中所述SEQ ID NO.2的第422位处的天冬氨酸残基或其它序列中的等同的天冬氨酸残基已被非负电荷的氨基酸残基置换。

5.根据前述权利要求中任一项所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含所述SEQ IDNO.2的氨基酸序列或与所述SEQ ID NO.2具有至少90％同一性的氨基酸序列，但是其中所述SEQ ID NO.2的第422位处的天冬氨酸残基或其它序列中的等同的天冬氨酸残基已被非负电荷的氨基酸残基置换。

6.根据前述权利要求中任一项所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含与SEQ IDNO.4具有至少60％同一性的氨基酸序列，但是其中所述SEQ ID NO.4的第719位处的天冬氨酸残基或其它序列中的等同的天冬氨酸残基已被非负电荷的氨基酸残基置换。

7.一种DNA聚合酶，其包含SEQ ID NO.11或12的氨基酸序列或与所述SEQ ID NO.11或12具有至少60％同一性的氨基酸序列，但是其中所述SEQ ID NO.11或12的第422位处的天冬氨酸残基或其它序列中的等同的天冬氨酸残基已被非负电荷的氨基酸残基置换。

8.根据前述权利要求中任一项所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含与SEQ IDNO.11或12具有至少90％同一性的氨基酸序列，但是其中所述SEQ ID NO.11或12的第422位处的天冬氨酸残基或其它序列中的等同的天冬氨酸残基已被非负电荷的氨基酸残基置换。

9.根据前述权利要求中任一项所述的DNA聚合酶，其中所述天冬氨酸残基已经被丙氨酸残基替代。

10.根据前述权利要求中任一项所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶的链置换活性比具有完全相同序列但相对于SEQ ID NO：1或2分别在第18位或第422位或在其它序列的等同位置处具有天冬氨酸的DNA聚合酶高至少30％。

11.根据前述权利要求中任一项所述的DNA聚合酶，其中在20mM至200mM NaCl或KCl或其混合物的浓度范围内，所述DNA聚合酶表现出其最大聚合酶活性的至少40％。

12.一种组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的DNA聚合酶和缓冲剂。

13.一种核酸分子，其包含编码根据权利要求1至11中任一项所述的DNA聚合酶的核苷酸序列。

14.根据权利要求13所述的核酸分子，其中，所述核苷酸序列与SEQ ID NO：13、14或15具有至少70％的序列同一性。