[发明专利]经基因修饰以消除T细胞受体和β2-微球蛋白表达的永生化CAR-T细胞

说明书

本发明涉及工程化永生化T细胞系；其制备方法；及其作为药物、特别是用于免疫疗法的用途。本发明的工程化永生化T细胞系的特征在于例如通过使用内切核酸酶来抑制内源性T细胞受体(TCR)和β2‑微球蛋白(B2M)的表达，所述内切核酸酶能够选择性地使TCR和B2M基因失活，以便使得永生化T细胞是非同种异体反应性的。此外，免疫抑制多肽的表达可在那些工程化永生化T细胞上执行，以便延长这些T细胞在宿主生物体中的存活。此类工程化永生化T细胞特别适用于同种异体移植，尤其是因为它既降低了被宿主的免疫系统排斥的风险，也降低了发生移植物抗宿主病的风险。本发明为使用永生化T细胞来治疗癌症、感染和自身免疫疾病的标准且负担得起的过继性免疫疗法策略开辟了道路。

序列表

本申请包含已经以ASCII格式电子递交的序列表，并且据此全文以引用方式并入。所述ASCII副本创建于2018年11月20日，命名为JBI5146WOPCT1_SL.txt，并且大小为67,258字节。

技术领域

本发明涉及表达嵌合抗原受体(CAR)的工程化永生化T细胞系；其制备方法；及其作为药物、特别是用于免疫疗法的用途。本发明的工程化永生化CAR T细胞的特征在于例如通过使用内切核酸酶来抑制内源性T细胞受体(TCR)和β2-微球蛋白(B2M)的表达，所述内切核酸酶能够选择性地使TCR和B2M基因失活，以便使得永生化CAR T细胞是非同种异体反应性的。工程化永生化CAR T细胞系特别适用于同种异体移植，尤其是因为它既降低了被宿主的免疫系统排斥的风险，也降低了发生移植物抗宿主病的风险。本发明为使用T细胞来治疗癌症、感染和自身免疫疾病的标准且负担得起的过继性免疫疗法策略开辟了道路。

背景技术

过继性免疫疗法涉及离体产生的自体抗原特异性T细胞的转移，是治疗病毒感染和癌症的一种有前途的策略。可通过对抗原特异性T细胞的扩增或通过基因工程将T细胞重定向来产生用于过继性免疫疗法的T细胞(Park,Rosenberg等人2011)。

通过转基因T细胞受体或嵌合抗原受体(CAR)的遗传转移已成功产生了在T细胞中的新型特异性(Jena,Dotti等人2010)。CAR是由与单个融合分子中的一个或多个信号结构域相关的靶向部分组成的合成受体。一般来讲，CAR的结合部分由例如单链抗体(scFv)的抗原结合结构域组成，所述抗原结合结构域包含通过柔性接头连接的单克隆抗体的轻链片段和可变片段。第一代CAR的信号结构域源于CD3ζ或Fc受体γ链的胞质区。已证明第一代CAR成功地重定向T细胞的细胞毒性。然而，它们未能在体内提供长效的扩增和抗肿瘤活性。已将来自共同刺激分子(包括CD28、OX-40(CD134)和4-1BB(CD137))的信号结构域单独地(第二代)或组合地(第三代)添加以增强存活并增加CAR修饰的T细胞的增殖。CAR已成功地允许T细胞针对在来自各种恶性肿瘤(包括淋巴瘤和实体瘤)的肿瘤细胞的表面处表达的抗原进行重定向(Jena,Dotti等人2010)。