[发明专利]用肉毒杆菌毒素治疗自主神经疾病

说明书

本发明涉及用包含来自BoNT/B、BoNT/D、BoNT/D‑C、BoNT/F或BoNT/G的Hcc结构域治疗自主神经疾病，其中待施用于患者的梭菌神经毒素的剂量等同于或低于通常用于治疗相同自主神经疾病的BoNT/A的剂量。

本发明涉及用神经毒素治疗自主神经疾病(autonomic disorders)。

梭菌属(Clostridia)中的细菌产生高度强效且特异的蛋白质毒素，所述毒素毒害它们被递送至的神经元和其他细胞。此类梭菌毒素的例子包括破伤风梭菌(C.tetani)产生的神经毒素(TeNT)和肉毒梭菌(C.botulinum)产生的神经毒素(BoNT)血清型A-G，以及巴拉迪梭菌(C.baratii)和丁酸梭菌(C.butyricum)产生的神经毒素。

梭菌神经毒素通过抑制外周神经系统、特别地通过抑制神经肌肉接头处的胆碱能传递而引起肌肉麻痹，并因此可以是致死的。实际上，梭菌神经毒素被合成为单链多肽，其通过蛋白水解切割事件在翻译后被修饰以形成通过二硫键连接在一起的两条多肽链。切割发生在特定的切割位点，通常称为活化位点，其位于提供链间二硫键的半胱氨酸残基之间。正是这种双链(dichain)形式是毒素的活性形式。两条链称为重链(H链)(其具有大约100kDa的分子量)和轻链(L链)(其具有大约50kDa的分子量)。H链包含N-末端易位组分(H_N结构域)和C-末端靶向组分(Hc结构域)。切割位点位于L链和H_N结构域之间。

梭菌神经毒素的作用方式取决于五个不同的步骤：(1)Hc结构域与其靶神经元的细胞膜结合，然后(2)结合的毒素通过内体内化到细胞中(3)H_N结构域将L链跨内体膜易位并进入胞质溶胶；(4)L链对称为SNARE蛋白的细胞内转运蛋白进行蛋白水解切割，其提供非细胞毒性的蛋白酶功能；以及(5)抑制靶细胞的细胞分泌。

在事件的这种级联中，SNARE蛋白(可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子(N-ethylmaleimide-Sensitive Factor)附着蛋白受体)是细胞内囊泡融合的必要组成部分，并因此是分子通过囊泡运输从细胞分泌所不可或缺的。存在于神经元中的SNARE蛋白质的例子尤其包括SNAP-25、VAMP或突触融合蛋白。另一方面，L链的非细胞毒性蛋白酶功能是锌依赖性内肽酶活性，其对SNARE蛋白表现出高的底物特异性。因此，梭菌神经毒素的非细胞毒性蛋白酶一旦被递送至神经元靶细胞，就会通过裂解其底物SNARE蛋白而抑制神经递质的释放，从而导致神经麻痹。

由于梭菌神经毒素独特的特性，梭菌神经毒素诸如肉毒杆菌毒素(botulinumtoxin)已成功用于大范围的治疗应用中，尤其是运动和自主神经疾病，以恢复例如多动神经末梢的活动达到正常水平。到目前为止，已经描述了至少七个抗原性独特的BoNT血清型，即BoNT/A,BoNT/B,BoNT/C,BoNT/D,BoNT/E,BoNT/F,BoNT/G(Rossetto,O.等人，Botulinumneurotoxins:genetic,structural and mechanistic insights.Nature ReviewsMicrobiology 12.8(2014):535-549)。尽管有这种多样性，BoNT/A仍然是治疗中的血清型选择，有三种市售的商业制剂(和)，而市场上只有一种BoNT/B产品到目前为止，这些BoNT/A和BoNT/B产品是从梭菌属菌株中纯化的毒素，是目前监管机构批准的两种仅用于人类的BoNT血清型，其应用范围尤其包括：痉挛、膀胱功能障碍或多汗症(对于BoNT/A)(参见例如https://www.medicines.orq.Uk/emc/medicine/112,https://www.medicines.orq.uk/emc/medicine/870,https://www.medicines.orq.uk/emc/medicine/2162，在此通过全部引用并入本文作为参考)至宫颈肌张力障碍(对于BoNT/B)(参见例如，https://www.medicines.orq.uk/emc/medicine/20568，在此通过全部引用并入本文作为参考)。