[发明专利]用于制备来源于MSC的外泌体的方法

权利要求书

1.一种从间充质干细胞(MSC)制备外泌体的方法，所述方法包括：

(a)在功能封闭的生物反应器中在包含人血小板裂解物(PLT)的培养基中培养MSC至75-95％汇合；

(b)在基本上不含PLT的培养基中进一步培养所述细胞；

(c)从所述生物反应器中收集条件培养基级分；以及

(d)从所述条件培养基级分中分离外泌体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在收集后将每个条件培养基级分储存于-80℃。

3.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤(d)之前将所述条件培养基级分解冻并合并。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述MSC进一步限定为来源于骨髓的MSC。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述MSC进一步限定为来源于脂肪的MSC。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其进一步包括在步骤(a)之前用至少1x10⁷个MSC接种所述生物反应器。

7.根据权利要求6所述的方法，其中以约400-500个细胞/cm²的密度接种所述MSC。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述封闭的生物反应器是中空纤维生物反应器。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述中空纤维生物反应器是Terumo细胞扩增系统。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中在步骤(a)的培养基中所述PLT的浓度为5％。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中向所述生物反应器中的MSC连续加入新鲜培养基。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述细胞在5％氧下培养。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中步骤(a)的培养持续5-10天。

14.根据权利要求13所述的方法，其中步骤(a)的培养持续8天。

15.根据权利要求1所述的方法，其中将所述MSC培养至80-90％汇合。

16.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中将所述MSC培养至85-90％汇合。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中步骤(b)的培养持续24-72小时。

18.根据权利要求17所述的方法，其中步骤(b)的培养持续48小时。

19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中步骤(b)的培养基不含PLT。

20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中在步骤(a)和(b)之间洗涤所述MSC。

21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述MSC在无血清的确定成分培养基中培养。

22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中步骤(a)-(d)在无血清条件下进行。

23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中将所述条件培养基级分收集在密封袋中。