[发明专利]用于制备BAP或BA细胞的方法

权利要求书

1.用于制备BAP细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在包含Wnt信号通路的激活剂的培养基中培养多潜能细胞以获得诱导的轴旁中胚层祖细胞(iPAM)，

b)在肌原性培养基中培养所述iPAM细胞，

c)可选地，在具有血清或其等价物，可选地还包含FGF2或其等价物的培养基中，进一步培养在步骤b)结束时所获得的细胞，

d)通过将在步骤b)或c)结束时所获得的细胞传代并将它们接种到培养皿中来选择BAP细胞。

2.用于制备BA细胞的方法，优选地根据权利要求1所述的方法，所述方法包括以下步骤：

优选地如权利要求1中所定义的步骤a)，步骤b)，可选的步骤c)和步骤d)，并且还包括以下步骤：

e)将所选择的BAP细胞，优选地在步骤d)结束时可获得的那些细胞在包含血清或其等价物的成脂培养基中培养，从而获得BA细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在还包含骨形态发生通路(BMP)信号通路的抑制剂和可选地DMSO的培养基中实施步骤a)。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中：

a)Wnt信号通路是典型的Wnt/β连环蛋白信号通路和/或Wnt/PCP信号通路，

b)BMP信号通路的抑制剂选自：Noggin、腱蛋白、腱蛋白样蛋白1-3、卵泡抑素、卵泡抑素样蛋白1-5、Dan家族成员及其变体和片段。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中使用包含培养基、血清或其等价物、BMP受体抑制剂、c-MET受体激活剂和IGF或胰岛素受体激活剂或者由其组成或基本由其组成的肌原性培养基实施步骤b)。

6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其中使用包含培养基、TGFβ/活化素/NODAL通路抑制剂(优选地SB431542)、EGF(表皮生长因子)受体激活剂(优选地，EGF)、抗坏血酸和类皮质激素受体激活剂(优选地氢化可的松)或基本由其组成的成脂培养基实施步骤e)。

7.根据权利要求2至6中任一项所述的方法，其中BA细胞的特征在于UCP1的表达。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中BAP细胞的特征在于它们转化为表达UCP1的BA细胞的能力。

9.通过根据权利要求2至7中任一项所述的方法可获得的BA细胞群体，包含至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％的表达UCP1的细胞。

10.通过根据权利要求1、3、4、5、8中任一项所述的方法可获得的BAP细胞群体，其特征在于所述群体转化为如权利要求9中所定义的BA细胞群体的能力。

11.根据权利要求9或10所述的BAP或BA细胞群体，用于作为药剂使用。

12.组合物，其包含根据权利要求9至11中任一项所述的BAP或BA细胞群体，优选地其中所述组合物是药物组合物。

13.根据权利要求11所述的BAP或BA细胞群体，其中所述药剂用于治疗与BA或BAP细胞活性有关的疾病或病况，并且所述疾病或病况优选地为代谢疾病或病况，如肥胖症相关病变、代谢综合征、糖尿病、高脂血症、NASH(非酒精性脂肪性肝炎)、能量平衡(摄入相对于消耗)。

14.如权利要求9或10中所定义的BAP或BA细胞群体用于筛选目的的应用。