[发明专利]用于制备BAP或BA细胞的方法

说明书

本发明涉及用于制备BAP或BA细胞的方法，所获得的BAP或BA细胞群体和它们作为药剂的应用。

技术领域

本发明涉及用于制备BAP(褐色脂肪细胞祖细胞)或BA(褐色脂肪细胞)细胞的方法、BAP或BA细胞群体以及它们作为药剂的应用。

背景技术

在哺乳动物中，两种主要类型的脂肪细胞共存，即褐色脂肪细胞(BA)和白色脂肪细胞(WA)，两种细胞类型均参与能量平衡控制，同时具有相反的功能。白色脂肪组织(WAT)分布于整个身体并且主要参与能量储存。与WAT相反，棕色脂肪组织(BAT)专门进行能量消耗。激活的BAT消耗代谢底物并使脂肪燃烧以通过解偶连环蛋白(UCP)-1产生热。据发现这种组织在新生儿和冬眠物种中具有较大的量。在人中，BAT的量随时间降低，并且在成年人中仅可以存在少量沉积。

BA具有显著的治疗潜力；在燃烧脂肪以产生热和调节身体的恒温性方面，它们已显示出促进体重降低和调节代谢参数，如糖血。因此，临床急需BAP和/或BA的细胞来源。

发明内容

本发明涉及用于制备BAP细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在包含Wnt信号通路的激活剂的培养基中培养多潜能细胞以获得诱导的轴旁中胚层祖细胞(iPAM)，

b)在肌原性培养基中培养所述iPAM细胞，

c)可选地，在包含血清或其等价物，可选地还包含FGF2或其等价物的培养基中，进一步培养在步骤b)结束时所获得的细胞，

d)通过将在步骤b)或c)结束时所获得的细胞传代并将它们接种到培养皿中来选择BAP细胞。

本发明还涉及用于制备BA细胞的方法，所述方法优选地包括如用于获得BAP细胞的方法中所定义的步骤a)，b)，可选地步骤c)，步骤d)，并且随后包括以下步骤：

e)将所选择的BAP细胞，优选地在步骤d)结束时可获得的那些细胞在包含血清或其等价物的成脂培养基中培养，从而获得BA细胞。

在一个实施方式中，可以在进一步包含骨形态发生通路(BMP)信号通路的抑制剂和可选地DMSO的培养基中实施步骤a)。

在优选的实施方式中：

a)Wnt信号通路是典型的Wnt/β连环蛋白信号通路和/或Wnt/PCP信号通路，

b)BMP信号通路的抑制剂选自：Noggin、腱蛋白、腱蛋白样蛋白1-3、卵泡抑素、卵泡抑素样蛋白1-5、Dan家族成员及其变体和片段。

在其他实施方式中，步骤b)中使用的肌原性培养基包含培养基、血清或其等价物、BMP受体抑制剂、c-MET受体激活剂和IGF或胰岛素受体激活剂或者由其组成或基本由其组成。

在一个实施方式中，实施方法，其中步骤e)的成脂培养基包含培养基、TGFβ/活化素/NODAL通路抑制剂(优选地，SB431542)、EGF受体激活剂(优选地，EGF(表皮生长因子))、抗坏血酸和类皮质激素受体激活剂(优选地，氢化可的松)或基本由其组成。

在其他实施方式中，BA细胞或BA细胞群体的特征在于UCP1的表达。

本发明还涉及通过如本文所定义的方法可获得的BA细胞群体，所述细胞群体包含至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％的表达UCP1的细胞。

本发明还涉及通过如本文所定义的方法可获得的BAP细胞群体，所述BAP细胞群体的特征在于所述群体转化为如本文所定义的BA群体的能力。