[发明专利]肿瘤抑素测定

说明书

本发明涉及一种用于检测肿瘤抑素的测定及其在评估诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、慢性肾病(CKD)(诸如由糖尿病、狼疮性肾炎(LN)和系统性红斑狼疮(SLE)引起的CKD)等肺癌中的用途。

技术领域

本发明涉及一种用于检测肿瘤抑素的测定及其在评估诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、慢性肾病(CKD)(诸如由糖尿病、狼疮性肾炎(LN)和系统性红斑狼疮(SLE)引起的CKD)等肺癌中的用途。

背景技术

基底膜(BM)是特殊的细胞外基质(ECM)，其充当上皮细胞和内皮细胞的支架并用作组织之间的屏障(1,2)。两种主要BM蛋白是IV型胶原蛋白和层粘连蛋白，它们共同形成通过硝化原和肝素硫酸盐蛋白聚糖连接在一起的独特网络(2-5)。IV型胶原具有六条不同α链α1-6，它们形成在哺乳动物BM中表达的异源三聚体(6)。IV型胶原(COL4α3)的α3链已被描述为跨越BM分布受限，并且通常在肺和肾脏中发现(7)。Alport综合征、Goodpasture综合征和针对肺和肾BM的几种自身免疫性疾病的临床表现说明了COL4α3的结构作用。这些疾病的特征在于突变或免疫攻击对COL4α3的损害，从而导致BM的泄漏(8-11)。BM充当细胞入侵的屏障。BM的破坏和BM完整性的丧失与浸润性癌症表型相关联(12)。因此，需要与BM的破坏和混乱相关联的癌症生物标志物。

肿瘤抑素(TUM)是COL4α3的经由αvβ3整联蛋白与内皮细胞结合的28-kDa片段(13)。它是基质金属蛋白酶9(MMP-9)产生的苦参碱，并且已知可以控制病理性血管生成和肿瘤生长(13-15)。需要MMP-9来从COL4α3裂解肿瘤抑素，以使得肿瘤抑素可以用作保护性苦参碱。缺乏MMP-9会加速MMP-9基因敲除小鼠的肿瘤生长。肺癌患者体内高水平的COL4α3mRNA与不良预后相关联(15,16)。几项研究已推测成熟度可能是具有治疗潜力的潜在生物标志物(10,17-19)。

Luo等人(20)开发了一种夹心ELISA，其用于定量人血清和组织提取物中的COL4α3/肿瘤抑素。然而，与健康对照相比，无转移性疾病的肺癌患者无显著差异，唯一相关的发现是与无转移性肺癌的患者相比，转移性肺癌患者的COL4α3/肿瘤抑素水平降低。因此，尽管Luo的ELISA可能能够定量人血清和组织提取物中的COL4α3/肿瘤抑素，但所述测定的诊断效用显示为受到一定限制。

发明内容

本发明人现在已经开发出展现极好的诊断效用的肿瘤抑素测定。

因此，在第一方面中，本发明涉及一种用于定量患者生物流体样品中的具有N端氨基酸序列PGLKGKRGDS(SEQ ID NO：1)的肽的免疫测定方法，所述方法包括将患者生物流体样品与与N端氨基酸序列PGLKGKRGDS(SEQ ID NO：1)特异性反应的单克隆抗体接触，并确定所述单克隆抗体与所述N端氨基酸序列之间的结合量。

优选地，所述单克隆抗体不特异性识别或结合所述N端氨基酸序列的N延伸的延长形式或所述N端氨基酸序列的N截短的短形式。在这方面，“N端氨基酸序列的N延伸的延长形式”是指延伸超过序列H₂N-PGLKGKRGDS(SEQ ID NO：1)的一个或多个氨基酸。例如，如果N端氨基酸序列H₂N-PGLKGKRGDS(SEQ ID NO：1)被亮氨酸残基延长，那么对应的“N延伸的延长形式”将为H₂N-LPGLKGKRGDS(SEQ ID NO：2)。类似地，“N端氨基酸序列的N截短的短形式”是指从序列H₂N-PGLKGKRGDS(SEQ ID NO：1)的N端去除的一个或多个氨基酸。例如，如果N端氨基酸序列H₂N-PGLKGKRGDS(SEQ ID NO：1)缩短了一个氨基酸残基，那么对应的“N截短的短形式”将为H₂N-GLKGKRGDS(SEQ ID NO：3)。