[发明专利]比伐卢定的合成方法

说明书

活性药物成分(API)比伐卢定(Bivalirudin)是20个氨基酸的肽，其含有一个碱基和5个氨基酸残基。化学式为C₉₈H₁₃₈N₂₄O₃₃，且分子量为2180.3g/mol。比伐卢定也被称为Angiomax。它是被指定用作抗凝剂的直接凝血酶抑制剂。本发明提供合成比伐卢定的方法，特别是提供使用Fmoc‑Leu‑Wang树脂作为载体的通过固相肽合成的比伐卢定合成方法。该方法具有收率高、副产物少和分离纯化简单的优点，且与现有技术相比，该方法节省时间且适用于中试和工业化生产。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，并且本发明特别是涉及比伐卢定的合成方法。

常规比伐卢定合成方法耗时且工艺复杂，并且不能大规模实现，且因此本领域技术人员致力于开发新的比伐卢定合成方法。

背景技术

固相肽合成(SPPS)是用于多肽合成的快速方法。然而，用于合成大量长肽如比伐卢定的常规SPPS既费时，又产生大量溶剂浪费。作为广泛使用的活性药物成分，比伐卢定是被指定用作抗凝剂的直接凝血酶抑制剂。开发用于制备大量高纯度比伐卢定的高效且经济的SPPS方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供比伐卢定的制备方法。

根据本发明的第一方面，提供用于生产比伐卢定的方法，比伐卢定通过使用固相肽合成(SPPS)来制备，其中该方法使用Fmoc-Leu-Wang树脂或Fmoc-Leu-2CT树脂、Rink酰胺ProTide(LL)树脂和ChemMatrix wang树脂作为载体进行多肽的固相合成。

此外，多肽固相合成方法中使用的偶联剂选自由2-肟氰乙酸乙酯、N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、N,N-二异丙基乙胺组成的组。

此外，在Fmoc脱保护方法中，加入哌啶/N,N-二甲基甲酰胺/甲酸(优选1/4体积的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺，甲酸5％-20％哌啶体积)/哌嗪，且加热条件优选借助于水浴、油浴或微波加热反应进行2至5分钟。

此外，在反应完成之后，用N,N-二甲基甲酰胺将多肽的固相合成反应中的反应物中的每个洗涤2-3次。

此外，在树脂上的多肽固相合成反应中的氨基酸缩合反应在50至120℃的温度下进行；反应时间根据温度优选为10至30分钟。

此外，进行在固相合成反应中的多肽的氨基酸缩合反应，并在进行裂解反应之前用氮气吹扫树脂。

此外，反应中加入的三氟乙酸的纯度为95％，温度为10-50℃，且裂解反应时间为1-3小时。

此外，在多肽的固相合成反应中，所使用的氨基酸的当量是树脂的摩尔量的两倍。

此外，将粗制的比伐卢定通过Pre-HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。

此外，将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时。

附图说明

图1是比伐卢定分子结构的示意图。

图2是制备的比伐卢定的HPLC分析。

图3是制备的比伐卢定的质谱。

具体实施方式

图1所示的比伐卢定是20个氨基酸的合成肽。现在将参考具体实施例描述本发明。必须理解的是，这些实例仅是对本发明的说明，而无意于限制本发明的范围。除非另有说明，否则百分比和份数均以重量计。除非另有说明，否则以下实例中使用的实验材料和试剂可从商业来源获得。

表1氨基酸缩写的列表