[发明专利]活体外诱导成体干细胞增殖及分化

权利要求书

1.一种用于诱导CD34+成体干细胞(CD34+ASC)活体外增殖及分化的组合物及方法，其包含：

(a)提供含有SEQ.ID.NO.7的至少一小RNA。

(b)提供含有LIF及bFGF/FGF2的至少一伤口愈合相关定义因子；及

(c)在活体外细胞培养条件下将(a)该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA与(b)该含有LIF及bFGF/FGF2的伤口愈合相关定义因子混合在一起，以诱导且维持该CD34+成体干细胞的增殖及分化。

2.如权利要求1所述的方法，其中该CD34+成体干细胞为皮肤成体干细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其中该CD34+成体干细胞为造血干细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其中该CD34+成体干细胞为神经干细胞。

5.如权利要求1所述的方法，其中该CD34+成体干细胞能够活体内形成成体干细胞利基或囊。

6.如权利要求1所述的方法，其中该CD34+成体干细胞能够分化成造血、神经元、皮肤、毛发、甲状腺组织细胞类型。

7.如权利要求1所述的方法，其中该CD34+成体干细胞具有多潜能性。

8.如权利要求1所述的方法，其中该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA含有至少一发夹样茎环结构。

9.如权利要求1所述的方法，其中该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA含有至少一发夹样microRNA前驱物。

10.如权利要求1所述的方法，其中该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA为miR-302前驱物(pre-miR-302)。

11.如权利要求1所述的方法，其中该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA为SEQ.ID.NO.1、SEQ.ID.NO.2、SEQ.ID.NO.3或SEQ.ID.NO.4，或其组合。

12.如权利要求1所述的方法，其中该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA为miR-302模拟siRNA。

13.如权利要求1所述的方法，其中该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA能够在该CD34+成体干细胞中进一步加工成SEQ.ID.NO.8、SEQ.ID.NO.9、SEQ.ID.NO.10或SEQ.ID.NO.11。

14.如权利要求1所述的方法，其中该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA能够下调AOF2(或称作KDM1 a或LSD1)、DNMT1、HDAC2或HDAC4。

15.如权利要求1所述的方法，其中该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA能够引起DNA脱甲基化。

16.如权利要求1所述的方法，其中该含有SEQ.ID.NO.7的小RNA能够增强且保持CD34+成体干细胞的多潜能性。

17.如权利要求1所述的方法，其中该含有LIF及bFGF/FGF2的伤口愈合相关定义因子可进一步包括选自以下的至少一选择性因子：似胰岛素生长因子(IGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生的生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转型生长因子(TGF)、肿瘤坏死因子(TNF)、干细胞因子(SCF)、同源盒蛋白质(HOX)、Notch、GSK、Wnt/β-连环蛋白信号、介白素及/或骨成形性蛋白质(BMP)。

18.如权利要求1所述的方法，其中该活体外细胞培养条件为在37℃下的无饲养层MSC增殖培养基。