[发明专利]一种石油烃降解菌降解石油烃能力的微量化检测方法在审
| 申请号： | 201910003964.4 | 申请日： | 2019-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN111394419A | 公开（公告）日： | 2020-07-10 |
| 发明（设计）人： | 郑瑾;王晓玲;陈宏坤;于文赫;杜显元;陈昌照;宋权威;张坤峰;宋佳宇 | 申请（专利权）人： | 中国石油天然气集团有限公司;中国石油集团安全环保技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/04 | 分类号： | C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人： | 闫加贺;姚亮 |
| 地址： | 100007 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 石油 降解 能力 微量 检测 方法 | ||
1.一种石油烃降解菌降解石油烃能力的微量化检测方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)在96孔微板的反应孔中依次加入碳源底物、含显色剂的石油烃降解培养基及石油烃降解菌液；
(2)将步骤(1)中已经接种的96孔微板进行恒温培养，并于波长590nm处测定96孔微板中已接种反应孔的吸光度值；
(3)计算96孔微板中每个时间点已接种反应孔颜色的相对变化率；
(4)根据所述每个时间点已接种反应孔颜色的相对变化率判断石油烃降解菌降解石油烃能力。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，96孔微板的反应孔中，所述碳源底物、含显色剂的石油烃降解培养基及石油烃降解菌液的总体积不超过180μL。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，在96孔微板的反应孔中依次加入10μL碳源底物、150μL含显色剂的石油烃降解培养基及20μL石油烃降解菌液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述碳源底物包括原油、汽油、柴油、烷烃、苯系物和多环芳烃中的一种或几种的组合。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，以所述含显色剂的石油烃降解培养基的总体积计，其包含：
硝酸铵：2.0g/L、磷酸氢二钾：1.5g/L、磷酸二氢钾：3.0g/L、七水合硫酸镁：0.1g/L、无水氯化钙：0.01g/L、乙二胺四乙酸二钠：0.01g/L、显色剂：0.5-1.0g/L。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，以所述含显色剂的石油烃降解培养基的总体积计，其包含：
硝酸铵：2.0g/L、磷酸氢二钾：1.5g/L、磷酸二氢钾：3.0g/L、七水合硫酸镁：0.1g/L、无水氯化钙：0.01g/L、乙二胺四乙酸二钠：0.01g/L、显色剂：0.75g/L。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含显色剂的石油烃降解培养基为于121℃灭菌15min后的培养基。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述显色剂包括2,6-二氯苯酚靛酚。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述石油烃降解菌液包括细菌菌液、真菌菌液、混菌菌液及土壤中微生物的总菌悬液。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述恒温培养为于25-30℃恒温培养。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述恒温培养为于30℃恒温培养。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述于波长590nm处测定96孔微板中已接种反应孔的吸光度值，包括：每隔6-24h于波长590nm处测定96孔微板中已接种反应孔的吸光度值，连续测定96-240h。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述于波长590nm处测定96孔微板中已接种反应孔的吸光度值，包括：每隔6-24h于波长590nm处测定96孔微板中已接种反应孔的吸光度值，连续测定168h。
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